人泪腺腺样囊性癌细胞的培养、观察及其肿瘤干细胞样细胞的分离培养

发布时间：2016-11-21 11:38

  本文关键词：人泪腺腺样囊性癌细胞的培养、观察及其肿瘤干细胞样细胞的分离培养，由笔耕文化传播整理发布。

《天津医科大学》 2013年

人泪腺腺样囊性癌细胞的培养、观察及其肿瘤干细胞样细胞的分离培养

周蓓清  

【摘要】：目的 1.为了获得人泪腺腺样囊性癌细胞,为建立人泪腺腺样囊性癌细胞系奠定前期基础。 2.初步了解人泪腺腺样囊性癌细胞的形态学特征,包括细胞形态、生长特点、细胞标志物和电镜结构,为深入了解该细胞提供理论依据。 3.证实人泪腺腺样囊性癌细胞中存在肿瘤干细胞样细胞,并进行初步分离培养和血清诱导分化,为深入研究人泪腺腺样囊性癌肿瘤干细胞提供理论支持。 方法 1.实验第一部分：取天津医科大学眼科医院(原天津医科大学眼科中心)2011年5月一例原发泪腺腺样囊性癌患者的新鲜肿瘤组织,采用组织块培养法,获得原代细胞。运用连续传代、机械刮除、反复贴壁和消化排除等方法去除杂细胞。利用相差显微镜、透射电镜、扫描电镜等观察细胞形态。采取细胞免疫化学法检测细胞波形蛋白(vimentin)、广谱细胞角蛋白(cytokeratin, pan)、S-100蛋白、结蛋白(desmin)、CD34等蛋白的表达情况。采用免疫组织化学法检测肿瘤组织vimentin)、cytokeratin (pan)、S-100蛋白、desmin等蛋白的表达情况。消化法绘制细胞生长曲线,计算细胞倍增时间。 2.实验第二部分：采用无血清培养法从人泪腺腺样囊性癌细胞中分离培养肿瘤干细胞样细胞,并对其进行血清诱导分化,证明其具有自我更新、不断增殖及可逆分化能力。 结果 1.国内外首次成功获得可稳定传代的人泪腺腺样囊性癌细胞(lacrimal adenoid cystic carcinoma, LACC):组织块原代培养第5天见周围开始有细胞爬出,此后细胞缓慢增殖,第32天进行首次传代,第69天发现典型的上皮样细胞克隆。运用多种方法去除杂细胞,至第8代细胞基本纯化。纯化后细胞己稳定传至100代以上。 2. LACC细胞具有以下形态学特征：1)相差显微镜下观察：细胞贴壁生长,核类圆形,核浆比高,核仁数个：核分裂相多见,可见瘤巨细胞；细胞排列不紧密时,细胞可呈长椭圆形、三角形、梭形、多角形等多种形态；细胞排列紧密时,呈多边形的上皮样细胞形态,表现为典型的“铺路石”样生长；密度继续增高时,细胞接触抑制消失。2)透射电镜和扫描电镜下观察：细胞呈现低分化恶性肿瘤细胞的典型特点,核浆比倒置,胞浆少,胞核大,异型性明显；核仁1至数个,核内染色质丰富,常染色质多见,异染色质边集；不同细胞内细胞器发育差别大；细胞间信号沟通丰富,丝状伪足多级分支。3)细胞免疫化学法观察细胞标志物的表达：vimentin、cytokeratin (pan)和S-100蛋白呈阳性,desmin、CD34蛋白呈阴性,与源肿瘤组织染色结果一致。4)细胞生长动力学分析：细胞生长曲线类似“S”形,细胞倍增时间37.1h。 3.利用无血清培养基从人泪腺腺样囊性癌细胞中成功获得呈类球形或葡萄串样细胞团生长的人LACC肿瘤干细胞样细胞。LACC细胞接种到无血清培养基24h后,即可观察到细胞团悬浮生长或半贴壁生长,细胞团内细胞形态均一,生长状态良好,随时间和传代增加,细胞团逐渐增大。 4.人LACC肿瘤干细胞样细胞团经血清诱导后可贴壁生长,贴壁细胞形态特点与LACC细胞相似。 结论 1.国内外首次获得纯化的人泪腺腺样囊性癌细胞,为建立稳定、永久的人泪腺腺样囊性癌细胞系奠定了前期基础,为深入研究人泪腺腺样囊性癌的生物学行为机制提供了重要的种子细胞。 2.证实了人泪腺腺样囊性癌细胞中存在肿瘤干细胞样细胞,具有自我更新、不断增殖及可逆分化等肿瘤干细胞特性,为人泪腺腺样囊性癌肿瘤干细胞的后续研究开辟了前期道路。

【关键词】：
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R739.7
【目录】：

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1 陈克力;梁后杰;江恒;陈建芳;裴莉;郑晨宏;;人HCT116结肠癌细胞系中CD133~+结肠癌干细胞分离及鉴定[J];第三军医大学学报;2009年04期

2 月文科;焦锋;刘彬;尤嘉琮;周清华;;人大细胞肺癌干细胞样细胞的富集及其功能研究[J];中国肺癌杂志;2011年06期

3 何荣根,张晓珊,周晓健,王峥,张秀丽,邱蔚六,韩玉昇,张荣兴;涎腺腺样囊性癌 Acc-2和 Acc-3细胞系的建立及其形态学观察[J];华西口腔医学杂志;1988年01期

4 周继陶;龚日祥;陈向征;周海俊;朱亚杰;刘素蕊;黄娟;毕锋;;人结直肠癌干细胞微球体培养及鉴定[J];四川大学学报(医学版);2009年05期

5 潘鹏;田福起;郭涛;孙浩;马克钧;周留正;;无血清悬浮培养肾癌干细胞表面标志CD133及端粒酶活性的表达[J];中国组织工程研究与临床康复;2009年27期

6 王锡山;刘彦龙;杨艳梅;;大肠癌细胞系Lovo中亚群(SP)细胞的分离培养和鉴定[J];世界华人消化杂志;2007年09期

7 钟秀风;李永平;葛坚;黄冰;彭福华;杜建阳;林建贤;伍忠銮;刘敬波;;人视网膜母细胞瘤肿瘤干细胞的分离培养[J];中国病理生理杂志;2006年06期

8 ;Preliminary screening and identification of stem cell-like sphere clones in a gallbladder cancer cell line GBC-SD[J];Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology);2011年04期

9 孙开华,俞光岩,王晶,朱晓滨;涎腺腺样囊性癌中基膜样物质的超微结构[J];中华口腔医学杂志;1999年05期

10 刘坤;华成舸;温玉明;潘剑;陈维绍;高庆红;;肿瘤干细胞在腺样囊性癌细胞系增殖和分化中的作用[J];中华口腔医学杂志;2007年05期

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1 张薇;腺样囊腺癌的血管生成拟态的研究及与肿瘤干细胞标志蛋白相关性分析[D];天津医科大学;2011年

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1 蒋东霞,杨胜利,何琳;恶性肿瘤患者外周血淋巴细胞mdr-1基因表达在原发耐药与继发耐药中的作用研究[J];癌变.畸变.突变;2002年04期

2 何琳,张巧,胡杰英;抗肿瘤药物体外诱导新鲜癌组织及其外周血淋巴细胞mdr-1基因表达的相关性研究[J];癌变.畸变.突变;2002年04期

3 何志颖,江千里,姚玉成,温丽敏,李建秀,王新民,胡以平,王健民;RFP标记的YCD基因在HeLa细胞中的表达及其介导的细胞毒性[J];癌变.畸变.突变;2004年05期

4 单保恩,李俊新,张静,梁文杰,李宏芬;中药香加皮与其易混品体外抑瘤效果研究[J];癌变.畸变.突变;2005年05期

5 朱京童;白玉;司文秀;刘洪喜;任曲辉;;中药白头翁提取物抗肿瘤活性的体外实验研究[J];癌变.畸变.突变;2007年01期

6 刘俊康;吴小兰;章荣华;徐启旺;;小鼠EP瘤细胞株建立的初步研究[J];癌变.畸变.突变;2007年04期

7 赵文红;庄颖;赵红;张鼎;;胆固醇诱导内皮细胞凋亡及抑制细胞增殖的实验研究[J];癌变.畸变.突变;2007年06期

8 杜牡丹;宋旭红;刘戈飞;梁斌;张巧霞;李蕊;谢健平;甘雪琼;黄东阳;;抗兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶单克隆抗体的制备和鉴定[J];癌变.畸变.突变;2008年03期

9 张铭清;;中华补血草黄酮抑制白血病细胞增殖的初探[J];安徽农学通报(上半月刊);2011年01期

10 李有文;魏风;郭志儒;陈创夫;;山羊痘病毒培养及其细胞病变观察研究[J];安徽农业科学;2009年03期

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1 陈琴;周果;熊文;周青;岳林先;;眼眶及眼球内肿块的超声及超声造影表现[A];2011'中国西部声学学术交流会论文集[C];2011年

2 郝冬海;曹珂;刘检;张予阳;;细胞损伤模型在化合物抗脑缺血活性筛选中的应用[A];2011年中国药学大会暨第11届中国药师周论文集[C];2011年

3 洪胜辉;张军;张蕊;王来娣;邵丹;张宜辉;董飚;段修军;龚道清;;鹅原代肝细胞的简易、高纯分离及培养[A];安全优质的家禽生产——第十五次全国家禽学术讨论会论文集[C];2011年

4 王德文;王炜;左红艳;姚华;常公民;王瑞娟;高亚兵;王水明;董波;张志毅;彭瑞云;;不同波段电磁辐射对淋巴细胞的损伤效应[A];第十二届中国体视学与图像分析学术会议论文集[C];2008年

5 杨夏;刘瑜;肖桃;蒙丽;;眼眶内肿瘤摘除并微型钛钉钛板内固定10例分析[A];2007年贵州省医学会眼科学分会第五届第三次学术年会论文汇编[C];2007年

6 路广林;郝钰;董建勋;郑宏;陈淑长;黄启福;;温脉通抑制血管平滑肌细胞增殖、迁移作用的实验研究[A];第三届全国中医药免疫学术研讨会论文汇编[C];2006年

7 陈磊;凌沛学;张天民;;硫酸软骨素对兔软骨细胞体外培养的影响[A];2009年中国药学大会暨第九届中国药师周论文集[C];2009年

8 陈磊;凌沛学;张天民;;硫酸软骨素对兔软骨细胞体外培养的影响[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年

9 李英;马勇江;许丽娜;张媛;李玉谷;;不同培养体系对小鼠胸腺上皮细胞体外培养的影响[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2008年

10 司红丽;王建娜;胡延春;王建华;;狗舌草总黄酮对L_(1210)细胞的体外作用研究[A];纪念中国畜牧兽医学会中兽医学分会成立30周年中国畜牧兽医学会中兽医学分会2009年学术年会、华东区第十九次中兽医科研协作与学术研讨会论文集[C];2009年

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1 李坤寅;橘荔散结丸有效部位对子宫肌瘤细胞增殖、凋亡及相关因子表达的影响[D];湖南中医药大学;2010年

2 钟兴;hNIS转染鼻咽癌介导放射性核素显像和治疗的实验研究[D];暨南大学;2010年

3 袁慧星;构建saRNA激活大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞iNOS基因表达治疗ED的体外实验研究[D];华中科技大学;2011年

4 谭琦;加味丹参饮诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的研究[D];湖南中医药大学;2011年

5 马丽菊;云南宣威肺癌细胞系侧群细胞特征分析[D];昆明医学院;2011年

6 张铭杰;成人MSCs体外定向成骨分化及激素性股骨头坏死MSCs活性研究[D];广州中医药大学;2011年

7 关永格;子宫腺肌病中医证型分布与化瘀止痛方及其拆方的干预机制研究[D];广州中医药大学;2011年

8 袁烁;化瘀消癥杀胚法对输卵管妊娠影响的临床与实验研究[D];广州中医药大学;2011年

9 周仕轶;肿节风对人前列腺癌DU-145细胞PI3K/Akt/mTOR信号传导通路的影响[D];成都中医药大学;2011年

10 张东;转fat-1基因体细胞克隆绵羊的研究[D];内蒙古农业大学;2011年

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1 施六霞;富血小板血浆对不同条件下人牙周膜成纤维细胞功能的影响[D];南京医科大学;2010年

2 谢鹏;脂多糖、多巴胺对凡纳滨对虾血细胞作用机制的研究[D];中国海洋大学;2010年

3 张贺佳;三种正畸用镍钛记忆合金丝细胞毒性的试验研究[D];中国医科大学;2010年

4 徐佳丽;白首乌总苷A（CGA）酸水解产物的抗肿瘤作用研究[D];浙江中医药大学;2010年

5 王代宪;负载BMP与VEGF的PDLLA组织工程材料修复兔桡骨缺损的实验研究[D];泰山医学院;2007年

6 王丽洁;凝血因子Ⅶ检测试剂的研制[D];北京协和医学院;2010年

7 高越颖;王不留行抑制血管新生有效部位的提取分离及其活性评价[D];江南大学;2010年

8 刘莉娜;远志与厚朴配伍对小鼠Cajal间质细胞的影响[D];成都中医药大学;2010年

9 张立静;TEM1型β-内酰胺酶免疫胶体金层析检测方法的建立[D];河北农业大学;2011年

10 肖颜颜;富硒大麦苗生物学功能的研究[D];鲁东大学;2011年

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1 李茗初;邓永文;伍军;陈风华;刘劲芳;方加胜;;髓母细胞瘤中脑肿瘤干细胞的分离培养及鉴定[J];癌症;2006年02期

2 倪晓光;赵平;;实体瘤肿瘤干细胞的研究进展[J];癌症;2006年06期

3 储亮;黄强;翟德忠;朱卿;霍红梅;董军;钱志远;王爱东;兰青;高宜录;;ABCG2在胶质瘤组织中的表达及意义[J];癌症;2007年10期

4 李亚娟;周洪澜;葛岩;张丽红;王心蕊;廖翔宇;高婷;王医术;;槲寄生碱对人腺样囊性癌细胞的抑制作用[J];吉林大学学报(医学版);2008年04期

5 翟羽佳;常文军;侯建国;谭晓洁;马立业;曹广文;;肾透明细胞癌CD133的表达及其体外对α-干扰素和5-氟尿嘧啶处理效果的影响[J];第二军医大学学报;2009年03期

6 许凤兰,李玉宝,姚晓明,王学江;纳米羟基磷灰石/聚乙烯醇复合人工角膜材料[J];复合材料学报;2005年01期

7 Monika Olempska;Patricia Alice Eisenach;Ole Ammerpohl;Hendrik Ungefroren;Fred Fandrich;Holger Kalthoff;;Detection of tumor stem cell markers in pancreatic carcinoma cell lines[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2007年01期

8 刘琳,何彦津;泪腺腺样囊性癌的放射治疗[J];国际眼科杂志;2004年05期

9 张虹;韩媛媛;周晓冬;何彦津;宋国祥;;眼眶腺样囊性癌动物模型的建立及局部化学治疗的初步观察[J];国际眼科杂志;2006年05期

10 欧敬民;叶酸与肿瘤发生[J];国外医学.外科学分册;2002年02期

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1 韩媛媛;局部应用化疗药物治疗眼眶腺样囊性癌的实验研究[D];天津医科大学;2006年

2 刘继东;ABCG2、CD_（133）在人脑胶质瘤中的表达及意义[D];昆明医学院;2006年

3 李剑波;加替沙星—羧甲基壳聚糖纳米粒的制备及其兔眼局部应用研究[D];第二军医大学;2007年

4 黄华兵;CD133在前列腺/前列腺增生/前列腺癌中的表达[D];南昌大学;2007年

5 胡振宇;ABCG2、MCM2在涎腺发育及肿瘤发生干细胞表达中的关系[D];浙江大学;2007年

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1 陈芳;邓晓光;宋琦;;涎腺腺样囊性癌单细胞增殖的实验研究[J];遵义医学院学报;2009年06期

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3 王毅;李冬梅;康莉;朱慧;黑砚;肖利华;;泪腺腺样囊性癌的组织病理学特征[J];眼科;2009年03期

4 张淑慧;王振常;鲜军舫;付琳;;泪腺腺样囊性癌的CT和MRI诊断[J];中国医学影像技术;2007年04期

5 王毅;康莉;黑砚;肖利华;;应用基因芯片筛选泪腺腺样囊性癌与正常泪腺组织差异表达的基因[J];眼科新进展;2010年09期

6 冯平柏;泪腺腺样囊性癌的临床治疗研究(附15例临床观察)[J];河南肿瘤学杂志;2001年05期

7 王毅;黑砚;肖利华;;泪腺腺样囊性癌的超微结构观察[J];眼科新进展;2011年02期

8 王韧琰;钟勇;施维;张福泉;;泪腺腺样囊性癌手术联合术后放疗一例[J];眼科;2007年04期

9 成继民;高奉浔;乔玉槐;;乳腺腺样囊性癌1例[J];中国肿瘤临床;1987年01期

10 戴敏,董世蓉;乳腺腺样囊性癌2例报道并文献复习[J];皖南医学院学报;2005年04期

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1 李克莉;;腺样囊性癌治疗方法的探讨[A];中华口腔医学会成立大会暨第六次全国口腔医学学术会议论文汇编[C];1996年

2 罗浩;林婷婷;梁晓飞;何彦津;常津;;长春新碱缓释微球对眼眶腺样囊性癌的治疗作用研究[A];天津市生物医学工程学会2008年年会暨首届生物医学工程与临床论坛论文集[C];2008年

3 李立伟;马潞娜;王骁;;头颈部复发性腺样囊性癌~(18)F-FDG PET/CT显像的临床价值[A];中华医学会第九次全国核医学学术会议论文摘要汇编[C];2011年

4 王庆国;李庆琪;;头颈部腺样囊性癌快中子治疗的初步分析[A];Fast Neutron Radiation Therapy--Proceedings of CCAST (World Laboratory) Workshop[C];1999年

5 方瑾;周水洪;雒星梅;姚洪田;;腺样囊性癌临床病理分析及Glut-1、PI3K/AKT信号通路的表达和意义[A];浙江省医学会耳鼻咽喉科学分会成立60周年庆典暨2011年浙江省医学会耳鼻咽喉头颈外科学学术年会论文汇编[C];2011年

6 王毅;李月月;肖利华;;眼眶腺样囊性癌的影像学研究[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年

7 宋晓萌;万宏坤;吴煜农;;肝素酶在唾液腺腺样囊性癌中的表达及其意义[A];第五次全国口腔颌面—头颈肿瘤学术研讨会论文汇编[C];2006年

8 戴春富;迟放鲁;王正敏;;外耳道腺样囊性癌的手术处理[A];中华医学会第十次全国耳鼻咽喉-头颈外科学术会议论文汇编（下）[C];2007年

9 程可佳;周水洪;汪审清;柴亮;王勤瑛;方荣凤;;外耳道原发性腺样囊性癌:附3例报告[A];2006年浙江省耳鼻咽喉科学术会议论文汇编[C];2006年

10 何亚会;史炜琪;高粉萍;;头颈部腺样囊性癌22例同期放化疗的护理分析[A];全国肿瘤护理学术交流暨专题讲座会议论文汇编[C];2006年

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1 记者 杨帆　实习生 杨周;[N];重庆日报;2009年

2 何雷;[N];健康报;2009年

3 记者 衣晓峰　靳万庆;[N];中国中医药报;2010年

4 衣晓峰　蓝建中;[N];医药经济报;2010年

5 衣晓峰;[N];中国医药报;2010年

6 吕斌;[N];医药导报(中药报);2004年

7 香港麦迪信医学出版有限公司供稿;[N];医药经济报;2003年

8 杨舒怡;[N];新华每日电讯;2010年

9 上海交通大学附属仁济医院副院长 陈芳源;[N];健康报;2010年

10 胡卫娜;[N];科技日报;2011年

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1 刘慧;巨噬细胞移动抑制因子在人唾液腺腺样囊性癌中的表达及作用[D];武汉大学;2013年

2 谢国柱;通过对肿瘤细胞致瘤潜能及上皮—间充质转化的研究探讨肿瘤干细胞假说的本质[D];南方医科大学;2012年

3 马波;人视网膜母细胞瘤肿瘤干细胞的分离鉴定及相关表面标志的初步研究[D];复旦大学;2011年

4 刘虹麟;肿瘤干细胞向不同肿瘤细胞分化的实验研究[D];中国协和医科大学;2009年

5 林婷婷;眼眶腺样囊性癌临床治疗与局部化疗的实验研究[D];天津医科大学;2010年

6 邹游;周期诱导联合化疗后耐药肿瘤细胞亚群与肿瘤干细胞相关性的研究[D];华中科技大学;2011年

7 刘培;沉默Id-1基因对人口腔癌细胞增殖、侵袭、凋亡的影响[D];山东大学;2010年

8 吴国民;口腔鳞状细胞癌肿瘤干细胞的分选和鉴定[D];吉林大学;2011年

9 王向阳;新型肿瘤细胞亚群NCCC的普遍性[D];华中科技大学;2013年

10 黄名威;乳腺癌MCF7细胞株中肿瘤干细胞的增殖及相关蛋白研究[D];广西医科大学;2010年

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1 周蓓清;人泪腺腺样囊性癌细胞的培养、观察及其肿瘤干细胞样细胞的分离培养[D];天津医科大学;2013年

2 保秋萍;多发性骨髓瘤U266细胞株中肿瘤干细胞的分离及生物学特性的初步研究[D];昆明医学院;2011年

3 陈坤;人喉癌细胞系Hep-2中的肿瘤干细胞与放疗抵抗关系的初步研究[D];河北医科大学;2010年

4 焦洁;人卵巢癌CD24-表型细胞的干细胞特征及上皮-间质转变的体外研究[D];浙江大学;2011年

5 孙晓彤;胃癌中肿瘤干细胞标志物的初步鉴定、表达及其临床病理学意义[D];兰州大学;2010年

6 黄稳定;肿瘤干细胞标志物CD133及胚胎干细胞Oct4在肺癌脊柱转移肿瘤组织中的表达及意义[D];第二军医大学;2010年

7 陈炬莹;乳腺癌细胞系中肿瘤干细胞相关亚群的初步研究[D];福建医科大学;2010年

8 王建鹏;Notch-1基因下调诱导GBM肿瘤干细胞肿瘤细胞凋亡的试验研究[D];青岛大学;2010年

9 安勇;体外吉西他滨筛选富集人胰腺癌细胞株SW1990肿瘤干细胞的研究[D];南京医科大学;2010年

10 王蒙;原发性乳腺癌患者循环肿瘤细胞及肿瘤干细胞的检测及临床意义[D];河北医科大学;2011年

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