环糊精包合物对激光诱发大鼠脉络膜新生血管形成的抑制作用

发布时间：2016-12-24 20:16

  本文关键词：柚皮素铜配合物、β-环糊精包合物对激光诱发大鼠脉络膜新生血管形成的抑制作用，由笔耕文化传播整理发布。

《南京中医药大学》 2014年

柚皮素铜配合物、β-环糊精包合物对激光诱发大鼠脉络膜新生血管形成的抑制作用

邵雁  

【摘要】：目的观察柚皮素铜配合物、β-环糊精包合物对激光诱发的大鼠脉络膜新生血管形成的抑制作用,并研究其作用机理。 方法选取50只(100眼)雄性Brown-Norway大鼠,其中40只建立大鼠脉络膜新生血管模型,10只(20眼)作正常对照。动物模型,随机分为模型对照组和3个不同给药对照组,每组10只。建立模型后,实验组大鼠均给予相等剂量的柚皮素、柚皮素铜配合物、β-环糊精包合物(20mg/kg/d)腹腔注射,正常对照组不给药。各组于造模后30d,常规处死动物,摘取眼球后,去除前节,取视网膜-脉络膜-巩膜复合体标本,在荧光显微镜下计算脉络膜新生血管的面积；免疫组织化学方法检测视网膜脉络膜中新生血管局部VEGF、COX-2的表达；real time-PCR及Western blot方法检测各组大鼠脉络膜组织中VEGF、 COX-2、PI3K、MAPK、MMP-2、MMP-9mRNA转录与蛋白的表达；采用差异蛋白组学检测各组蛋白质的表达差异。 结果 1.柚皮素与铜离子形成的配合物易溶于DMSO,柚皮素和β-CD形成了稳定的包合物使柚皮素的水溶性提高了11.8倍,两者提高了柚皮素的生物利用度。 2.模型动物CNV观察及面积计算(×103μm2):模型对照组为34.56±1.76、柚皮素组为20.90±1.47、柚皮素铜配合物组为13±1.43、柚皮素p-CD包合物组为13.24±1.33。各个实验组大鼠新生血管的面积均相对减少,柚皮素、柚皮素铜配合物及p-CD组面积明显小于模型对照组(P0.05、0.01),柚皮素铜配合物及p-CD组均小于柚皮素组(P0.05)。但是,柚皮素铜配合物、p-CD包合物组相比较,差异无统计学意义(P0.05); 3.免疫组织化学检查显示：组织光凝区有瘢痕形成及棕黄色阳性颗粒细胞表达,模型对照组光凝区呈现大量棕色颗粒,COX-2、VEGF高表达；柚皮素组、柚皮素铜配合物组及β-CD包合物组,光凝区棕色颗粒减少,COX-2、VEGF表达弱阳性。 4.RT-PCR:模型组mRNA表达相较于正常组明显增强,两组间差异有显著统计学意义(P0.05、0.01)；与模型对照组相比,各实验组基因表达水平均有所下降,柚皮素铜配合物及p-CD包合物组下降幅度大于柚皮素组,除P38MAPK外,差异均有统计学显著性(P0.05)；柚皮素铜配合物与β-CD包合物两组间相比较差异无统计学意义(P0.05)。 5.Western blotting:各组间的蛋白表达存在一定的差异性,差异均具有统计学意义(P0.05、0.01)；模型组蛋白表达水平均高于正常对照组,差异均有显著统计学意义(P0.05、0.01)；柚皮素铜配合物、β-CD包合物组蛋白表达低于柚皮素组,除P38MAPK、PI3K、MMP-2外,差异均有统计学意义(P0.05),但两组之间无显著性差异(P0.05)。 6.蛋白质组分析：各组间蛋白质表达具有较大的差异,除柚皮素铜配合物与β-CD包合物组外,组间差异有统计学显著性(P0.05)。 结论相较于柚皮素,合成的铜配合物提高了其生物活性,β-CD包合物显著增强了药物的水溶性,两者抑制CNV的作用增强；观察到柚皮素铜配合物、β-CD包合物围绕COX-2对相关信号通道及细胞因子表达的影响,在一定程度上,COX-2可调节VEGF、MMP-2、MMP-9的表达,影响PI3K、MAPK信号通路的活化；从宏观到微观层面阐明了柚皮素铜配合物、β-CD包合物抑制CNV形成发展的作用及相关机制。

【关键词】：
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R773.4
【目录】：

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