肺炎链球菌荚膜多糖加重C57BL/6小鼠中耳炎的炎症应答和中耳组织损伤
发布时间：2020-12-03 21:17
目的:研究肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae,S.pn）荚膜多糖（capsular polysaccharide,CPS）对C57BL/6小鼠急性中耳炎的炎症应答和组织损伤的作用。方法:首先通过同源重组的方式构建TIGR4Δcps菌株,然后经鼓膜穿刺,分别接种5μl/耳的TIGR4和TIGR4Δcps于C57BL/6小鼠的双侧中耳腔,对照组采用相同方法接种等体积无菌磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline,PBS）。观察小鼠发病情况,分别于感染后1、3、5 d制备中耳组织切片,HE染色观察中耳组织损伤及炎性细胞浸润变化,同时收集中耳灌洗液（middle ear lavage fluids,MELF）,检测MELF中细菌载量、炎性细胞数量和细胞因子含量。结果:成功构建了TIGR4Δcps菌株。与TIGR4组相比,TIGR4Δcps组小鼠中耳上皮的损伤更轻,中性粒细胞募集减少（第1天时P=0.004;第3天时P=0.000;第5天时P=0.000）,MELF中细胞因子TNF-α和IL-6水平更低（第1天时P=0.076、P=0.000;第3...
【文章来源】：重庆医科大学学报. 2015年09期 第1175-1180页 北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
小鼠接种PBS，TIGR4或TIGR4Δcps后体质量变化结果
2±0.9817.01±1.0317.06±1.3916.19±0.9914.96±1.0215.33±1.0516.64±0.7414.40±1.6015.34±1.2316.56±0.3914.79±1.8815.92±1.4840.2043.6296.24516.71±0.6214.76±1.6815.95±1.490.0000.0400.00016.93±0.6815.77±1.5516.65±1.3017.25±0.6416.01±1.3516.60±1.3517.40±0.4315.97±1.2516.73±1.34图2小鼠接种PBS，TIGR4或TIGR4Δcps后体质量变化结果（n=10）Fig.2ChangesinweightofmiceinoculatedwithPBS，TIGR4orTIGR4Δcps（n=10）图3中耳组织切片HE染色（400×）Fig.3HEstainingofsectionsofmiddleeartissue（400×）表3小鼠接种S.pn后MELF中的CFU（x±s）Tab.3CFUofMELFfromMiceinoculatedwithS.pn（x±s）分组例数（n）TIGR4组TIGR4Δcps组t值P值551200.00±564.98360.00±424.032.6590.029484.00±258.2248.00±46.043.7170.006第1天第3天图4中耳腔的炎症细胞募集（HE染色40×）Fig.4Recruitmentsofinflammatorycellsinmiddleearcavity（HEstaining40×）201816141201234567天数（d）小鼠体质量（g）PBSTIGR4TIGR4Δcps第1天第3天第5天PBSTIGR4TIGR4Δcps第1天第3天第5天PBSTIGR4TIGR4Δcps—1178—
4Δcps组增厚明显，黏膜下炎症细胞的募集明显多于缺陷组，骨质破坏也更严重，表明CPS加重了中耳组织损伤。2.4TIGR4和TIGR4Δcps中耳炎的细菌清除比较对MELF进行细菌铺板计数CFU，PBS组小鼠在整个病程中均未检测到细菌，实验组结果如表3所示，TIGR4与TIGR4Δcps均于接种后第5天被完全清除，但在第1天和第3天，TIGR4组的细菌载量明显高于TIGR4Δcps组，表明TIGR4Δcps更易被宿主清除。2.5TIGR4和TIGR4Δcps中耳炎的炎症细胞募集比较小鼠接种PBS、TIGR4、TIGR4Δcps后第1、3、5天的组织切片进行HE染色，如图4所示，PBS组中耳腔内中性粒细胞的募集均较少，TIGR4组募集的炎症细胞数量明显多于TIGR4Δcps组。同时，对MELF细胞计数，如表4结果显示，灌洗液中的炎症细胞在接种后第3天达峰值，TIGR4组募集的炎症细胞数量明显多于TIGR4Δcps组。流式细胞术分类计数结果显示＞95%炎症细胞为中性粒细胞（图略）。2.6TIGR4和TIGR4Δcps中耳炎的TNF-α和IL-6表达差异比较炎症细胞因子检测结果见表5、表6。TIGR4组和TIGR4Δcps组的MELF中TNF-α的表达在第3天达高峰，IL-6的表达在第1天达高峰，但TIGR4组MELF中的TNF-α水平和IL-6水平均明显高于TIGR4Δcps组。表2小鼠接种PBS，TIGR4或TIGR4Δcps后体质量变化结果（x±s，g，n=10）Tab.2ChangesinweightofmiceinoculatedwithPBS，TIGR4orTIGR4Δcps（x±s，g，n=10）分组第0天第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天PBS组TIGR4组TIGR4Δcps组F时间，P时间F处理，P处理F交互，P交互16.72±0.9817.01±1.0317.06±1.3916.19±0.9914.96±1.0215.33±1.0516.64±0.7414.40±1.6015.34±1.2316.56±0.39
【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠急性中耳炎模型的建立[J]. 周爱娥,王维,项云,黄益飞,董姗姗,何於娟. 激光杂志. 2013(04)
[2]肺炎链球菌comX基因可影响细菌毒力基因表达[J]. 张雪梅,尹一兵,孟江萍,许颂霄,王虹,黄远帅. 第四军医大学学报. 2007(08)
硕士论文
[1]转化缺失的无荚膜肺炎链球菌作为活疫苗候选菌株的安全性及保护效果评价研究[D]. 王一平.重庆医科大学 2013
本文编号：2896555
【文章来源】：重庆医科大学学报. 2015年09期 第1175-1180页 北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
小鼠接种PBS，TIGR4或TIGR4Δcps后体质量变化结果
2±0.9817.01±1.0317.06±1.3916.19±0.9914.96±1.0215.33±1.0516.64±0.7414.40±1.6015.34±1.2316.56±0.3914.79±1.8815.92±1.4840.2043.6296.24516.71±0.6214.76±1.6815.95±1.490.0000.0400.00016.93±0.6815.77±1.5516.65±1.3017.25±0.6416.01±1.3516.60±1.3517.40±0.4315.97±1.2516.73±1.34图2小鼠接种PBS，TIGR4或TIGR4Δcps后体质量变化结果（n=10）Fig.2ChangesinweightofmiceinoculatedwithPBS，TIGR4orTIGR4Δcps（n=10）图3中耳组织切片HE染色（400×）Fig.3HEstainingofsectionsofmiddleeartissue（400×）表3小鼠接种S.pn后MELF中的CFU（x±s）Tab.3CFUofMELFfromMiceinoculatedwithS.pn（x±s）分组例数（n）TIGR4组TIGR4Δcps组t值P值551200.00±564.98360.00±424.032.6590.029484.00±258.2248.00±46.043.7170.006第1天第3天图4中耳腔的炎症细胞募集（HE染色40×）Fig.4Recruitmentsofinflammatorycellsinmiddleearcavity（HEstaining40×）201816141201234567天数（d）小鼠体质量（g）PBSTIGR4TIGR4Δcps第1天第3天第5天PBSTIGR4TIGR4Δcps第1天第3天第5天PBSTIGR4TIGR4Δcps—1178—
4Δcps组增厚明显，黏膜下炎症细胞的募集明显多于缺陷组，骨质破坏也更严重，表明CPS加重了中耳组织损伤。2.4TIGR4和TIGR4Δcps中耳炎的细菌清除比较对MELF进行细菌铺板计数CFU，PBS组小鼠在整个病程中均未检测到细菌，实验组结果如表3所示，TIGR4与TIGR4Δcps均于接种后第5天被完全清除，但在第1天和第3天，TIGR4组的细菌载量明显高于TIGR4Δcps组，表明TIGR4Δcps更易被宿主清除。2.5TIGR4和TIGR4Δcps中耳炎的炎症细胞募集比较小鼠接种PBS、TIGR4、TIGR4Δcps后第1、3、5天的组织切片进行HE染色，如图4所示，PBS组中耳腔内中性粒细胞的募集均较少，TIGR4组募集的炎症细胞数量明显多于TIGR4Δcps组。同时，对MELF细胞计数，如表4结果显示，灌洗液中的炎症细胞在接种后第3天达峰值，TIGR4组募集的炎症细胞数量明显多于TIGR4Δcps组。流式细胞术分类计数结果显示＞95%炎症细胞为中性粒细胞（图略）。2.6TIGR4和TIGR4Δcps中耳炎的TNF-α和IL-6表达差异比较炎症细胞因子检测结果见表5、表6。TIGR4组和TIGR4Δcps组的MELF中TNF-α的表达在第3天达高峰，IL-6的表达在第1天达高峰，但TIGR4组MELF中的TNF-α水平和IL-6水平均明显高于TIGR4Δcps组。表2小鼠接种PBS，TIGR4或TIGR4Δcps后体质量变化结果（x±s，g，n=10）Tab.2ChangesinweightofmiceinoculatedwithPBS，TIGR4orTIGR4Δcps（x±s，g，n=10）分组第0天第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天PBS组TIGR4组TIGR4Δcps组F时间，P时间F处理，P处理F交互，P交互16.72±0.9817.01±1.0317.06±1.3916.19±0.9914.96±1.0215.33±1.0516.64±0.7414.40±1.6015.34±1.2316.56±0.39
【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠急性中耳炎模型的建立[J]. 周爱娥,王维,项云,黄益飞,董姗姗,何於娟. 激光杂志. 2013(04)
[2]肺炎链球菌comX基因可影响细菌毒力基因表达[J]. 张雪梅,尹一兵,孟江萍,许颂霄,王虹,黄远帅. 第四军医大学学报. 2007(08)
硕士论文
[1]转化缺失的无荚膜肺炎链球菌作为活疫苗候选菌株的安全性及保护效果评价研究[D]. 王一平.重庆医科大学 2013
本文编号：2896555
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