敲除长链非编码RNA MALAT-1基因对人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞的抑制作用

发布时间：2021-03-25 04:33

　　目的:喉癌,作为头颈部肿瘤的一种,在所有呼吸系统肿瘤中居第二位。大约2%³%的呼吸系统恶性肿瘤为喉癌。目前喉癌的治疗方法包括手术治疗、放疗和化疗。手术是喉癌治疗最多使用的方法。手术治疗的原则是在完全切除肿瘤的前提下尽可能保留喉的发声功能,目的是提高喉癌患者的术后生活质量。然而,一项流行病学调查显示,在过去的20年间,喉癌的临床治疗效果尚不尽如人意。因此,从分子水平开展喉癌的发生发展机制的研究将有助于提高喉癌的诊治水平。本研究从分子水平探讨敲除长链非编码RNA MALAT-1基因对人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞的抑制作用。方法:使用实时聚合酶链反应（RT-PCR）以永生化鼻咽上皮（NPE）细胞株NP-69作为参照检测FaDu、Hep-2和鼻咽癌CNE-2Z细胞MALAT1的表达,使用shmalat1慢病毒转染Hep-2细胞,RT-PCR检测其MALAT1的表达。增殖速率分析,MTT法明确MALAT-1对细胞增殖的影响。流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡。采用Transwell小室检测Hep-2细胞的迁移。最后使用Matrigel侵袭实验评估shmalat1和shCtrl... 

【文章来源】：蚌埠医学院安徽省

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

敲除人喉鳞状细胞癌细胞和Hep-2细胞MALAT1基因的结果

我们通过流式细胞仪评估细胞周期各时相的 Hep-2 细胞（图2A）。与 MOCK and shCtrl 细胞相比， MALAT1-shRNA 慢病毒转染细胞 S 期细胞数量显著增加（P＜0.01，图 2B）。此外，细胞在 G2／M 期的百分比下降（P＜0.01)。总之，这些数据表明，由于失去 MALAT1，细胞阻滞在 S 期。图 2 敲除 MALAT1 导致细胞周期阻滞Figure 2. MALAT1 knockdown leads to cell cycle arrest. (A) Cell cycle phases ofHep-2 cells were analyzed by flow cytometry. (B) Compared to MOCK and shCtrlcells, MALAT1 knockdown cells showed a significant increase in the proportion ofcells in the S phase (P< 0.01). In addition, in MALAT1 cells, a significant decreasewas observed in the proportion of cells in the G2/M phase (P < 0.01) compared to theMOCK and shCtrl cells.3.3 敲除 MALAT1 对 Hep-2 细胞克隆形成的抑制作用经过克隆形成实验测定结果，敲除 MALAT1 抑制 Hep-2 细胞克隆的能力。敲除 MALAT1 的 Hep-2 细胞克隆能力明显受损，下降约 7.5%。shCtrl 慢病毒处理过的细胞中观察到了平均 124 个

图 3 敲除 MALAT1 不影响人喉鳞状细胞癌 HFigure 3. Knockdown of MALAT1 does notmalignant LSCC Hep-2 cells. A) Representativecells in a 6-well plate. B) Colony formationlentivirus (MOCK), shCtrl and shMALAT1. ThSD of three separate experiments ( P < 0.05; P <3.4 流式细胞仪进行凋亡定量分析MALAT1 的低表达诱使 Hep-2 细胞凋亡，亡程度由 Annexin v-apc 染色和流式细胞仪检用流式细胞仪进行凋亡定量分析表明，与未转比(5.74% ± 0.22%)，敲除 MALAT1 的 Hep-2 细0.15%) (P < 0.01)。


本文编号：3099032