结膜成纤维细胞由来的警报素对角膜成纤维细胞的促炎作用

发布时间：2021-04-13 13:06

　　目的严重烧伤可致眼表结膜组织大量坏死,并导致角膜基质持续性炎症反应及溃疡形成。本研究探讨结膜成纤维细胞坏死上清产生的警报素（alarmins）对人角膜基质成纤维细胞（HCFs）释放促炎因子及粘附分子的影响。方法通过冻融方法制备结膜成纤维细胞坏死上清（NHCS）,用NHCS、IKK2抑制剂、IL-1及TNF-α受体拮抗剂对HCFs进行处理。ELISA检测IL-6、IL-8及MCP-1的表达,Western blot分析ICAM-1表达及IκB-α磷酸化,免疫荧光染色检测NF-κB p65亚基定位。结果 NHCS可刺激HCFs表达IL-6、IL-8、MCP-1和ICAM-1,激活IκB-α磷酸化,并介导NF-κB p65亚基的核内转移。此外,IKK2抑制剂、IL-1及TNF-α受体拮抗剂可抑制NHCS诱导的上述炎性介质的表达。结论由结膜成纤维细胞坏死上清产生的警报素包括IL-1和TNF-α,可通过激活NF-κB信号通路促进角膜基质成纤维细胞表达促炎因子和粘附分子。IL-1和TNF-α可能成为改善严重眼烧伤角膜基质炎症反应的潜在治疗靶点。 

【文章来源】：中国实验诊断学. 2020,24(06)

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

NHCS对HCFs释放炎性因子、趋化因子及粘附分子的影响

NF-κB信号通路在眼部炎症中起着重要作用。为了研究NHCS对HCFs中NF-κB信号可能的影响，我们用3×105cell/mL NHCS对HCFs进行了不同时间的处理。免疫印迹分析表明，NHCS以一种时间依赖的方式激活参与NF-κB信号通路途径的IκB-α（图2A）。免疫荧光染色显示，NF-κB p65亚基（绿色荧光）在NHCS处理30min后进入细胞核。（图2B）注：标尺为20μM。以上结果表明，NHCS可通过诱导IκB-α磷酸化和介导NF-κB p65亚基入核参与NF-κB信号通路。2.3 IKK-2抑制剂对NHCS诱导HCFs产生炎性介质的影响

为了确定NF-kB信号通路在HCFs产生炎性介质过程中的作用，用不同浓度的NF-kB信号通路抑制剂IKK-2抑制剂（0、0.3、1、3、10μM）孵育2h，然后用3×105cell/mL NHCS+IKK2抑制剂孵育24h。ELISA检测显示，添加IKK-2抑制剂的组能明显抑制NHCS所诱导的IL-6（图3A）、IL-8（图3B）和MCP-1（图3C）的表达，且呈浓度依赖性减少。同时，免疫印迹分析表明，用IKK-2抑制剂能够显著抑制NHCS诱导的粘附分子ICAM-1的表达（图3D）。以上表明，IKK-2抑制剂可抑制NHCS所诱导的HCFs炎症反应。2.4 IL-1受体拮抗剂（IL-1RA）和TNF-α受体拮

【参考文献】：
期刊论文
[1]Role of corneal collagen fibrils in corneal disorders and related pathological conditions[J]. Hong-Yan Zhou,Yan Cao,Jie Wu,Wen-Song Zhang.  International Journal of Ophthalmology. 2017(05)



本文编号：3135352