人视网膜色素上皮细胞中调节葡萄糖转运蛋白基因表达变化的研究

发布时间：2021-05-16 06:24

　　目的:调节人视网膜色素上皮细胞中葡萄糖转运蛋白的基因表达,探讨下调葡萄糖转运蛋白相关基因表达的可能。方法:采用基因编辑系统对人源视网膜ARPE-19宿主细胞进行相应的基因编辑,运用Crispr Cas 9基因编辑系统对细胞中的葡萄糖转运蛋白基因进行敲除,并且对细胞中的目标基因葡萄糖转运蛋白的基因编辑效率进行验证,考察基因编辑系统在人视网膜色素上皮中的编辑效果。结果:实现了葡萄糖转运蛋白相关基因的敲除,完成了人源视网膜色素上皮细胞ARPE-19基因缺陷型单克隆细胞株的构建。结论:利用Crispr Cas9技术对视网膜细胞的内源性基因进行编辑,有可能作为基因治疗糖尿病性视网膜病变的新策略。我们证实了设计的针对葡萄糖转运蛋白的sgRNA可以准确靶向并定点切割目标基因,并且这种治疗策略在细胞学方面是安全有效的。使用sgRNA对内源葡萄糖转运蛋白基因进行了敲除是具有治疗意义的,从根本上解决了糖尿病性视网膜病变眼内葡萄糖蓄积而产生的各种细胞损害,是一种潜在的治疗糖尿病性视网膜病变的手段。 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：40 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第1章 综述
    1.1 糖尿病性视网膜病变的发病机理
        1.1.1 糖尿病性视网膜病变发病的相关因素
        1.1.2 糖尿病性视网膜病变发病的相关机制
    1.2 糖尿病性视网膜病变的治疗方法
        1.2.1 药物治疗
        1.2.2 非药物治疗
    1.3 糖尿病性视网膜病变的基因水平的治疗
        1.3.1 高血糖
        1.3.2 缺氧
        1.3.3 血管紧张素Ⅱ
第2章 实验内容
    2.1 检测细胞
        2.1.1 细胞状态检测
        2.1.2 目标基因检测
        2.1.3 检测结果
    2.2 SGRNA设计、制备及体外筛选,CRISPR载体构建以及SGRNA细胞内筛选
        2.2.1 SGRNA设计
        2.2.2 SGRNA制备
        2.2.3 SGRNA体外筛选
        2.2.4 CRISPR载体构建
        2.2.5 SGRNA细胞内筛选
    2.3 完成单克隆细胞的培养和单克隆细胞的筛选
        2.3.1 单克隆细胞的培养
        2.3.2 单克隆细胞的筛选
    2.4 单克隆细胞质量检测
        2.4.1 将筛选完成的单克隆细胞株扩大培养后进行支原体检测
        2.4.2 培养的单克隆细胞株生长状态正常
参考文献
作者简介
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]复方丹参滴丸对非增殖性糖尿病视网膜病变的治疗效果观察[J]. 谢德权,丘培愈,李万成.  现代诊断与治疗. 2017(14)
[2]硫辛酸胶囊治疗老年单纯型糖尿病视网膜病变的疗效[J]. 张新芳,董凯霞.  中国老年学杂志. 2015(15)
[3]48例眼底病患者应用复方血栓通胶囊治疗的临床效果观察[J]. 陶松丽.  医学理论与实践. 2014(07)
[4]复方血栓通胶囊治疗视网膜静脉阻塞临床观察[J]. 徐梅,吴华,张弛.  大家健康(学术版). 2014(06)
[5]高血压眼底病变360例临床分析[J]. 罗贵梅,张瑞田,施建华.  山西医药杂志. 2013(06)
[6]激光联合复方血栓通胶囊治疗CSC的疗效[J]. 叶静,杨雪艳,曾胜.  国际眼科杂志. 2013(06)
[7]药物干预对早期糖尿病视网膜病变患者视野缺损的影响[J]. 龙艳,唐艳,王治荣,刘倪巧,徐炫.  中国老年学杂志. 2013(04)
[8]芪参益气滴丸对糖尿病大鼠视网膜血管内皮生长因子和色素上皮衍生因子表达的影响[J]. 苑维,金明,邓辉,潘琳,刘海丹.  中日友好医院学报. 2013(01)
[9]奥曲肽玻璃体腔注射对视网膜新生血管的抑制作用及其机制探讨[J]. 郭乾乾,李双农,焦小丽.  中国伤残医学. 2012(03)
[10]倍频Nd:YAG激光光凝对不同分期糖尿病视网膜病变患者视力康复的影响[J]. 陈放,庄朝荣,赵明.  国际眼科杂志. 2007(06)

硕士论文
[1]增殖型糖尿病性视网膜病变患者玻璃体切割术前应用雷珠单抗的临床疗效[D]. 李相哲.延边大学 2015



本文编号：3189154