沉默变异性浆细胞瘤异位1抑制鼻咽癌细胞增殖作用的机制研究

发布时间：2021-05-17 23:59

　　目的探讨变异性浆细胞瘤异位1（plasmacyto-mavarianttranslocation1,PVT1）抑制鼻咽癌细胞增殖的分子机制。方法构建特异性的shRNA PVT1慢病毒载体,包装慢病毒（LV/shRNA PVT1）并转导鼻咽癌C666-1细胞,检测Smad4的表达;LV/shRNA PVT1转导C666-1细胞24 h后转染Smad4 siRNA,通过细胞计数、四甲基偶氮唑蓝（MTT）法及流式细胞术分析沉默Smad4对LV/shRNA PVT1介导的鼻咽癌细胞生长及细胞周期的影响,并检测细胞周期相关调控因子的表达。结果下调PVT1后鼻咽癌细胞中Smad4的表达升高,而用siRNA沉默Smad4表达后,结果显示,抑制Smad4表达可阻断LV/shRNA PVT1介导的细胞生长抑制效应,同时细胞周期结果显示,与对照组相比,shRNA PVT1/Smad4 siRNA组细胞G1期比例降低,S期和G2期比例升高,并且CDK4、CDK6及c-myc的mRNA水平升高。结论下调PVT1可抑制鼻咽癌细胞增殖,并升高Smad4的表达,沉默Smad4可阻断shRNA PVT1对鼻咽癌细胞增... 

【文章来源】：中国耳鼻咽喉颅底外科杂志. 2020,26(05)

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 细胞株和主要试剂
        1.1.2 siRNA的设计
    1.2 方法
        1.2.1 细胞培养
        1.2.2 病毒包装及浓缩
        1.2.3 荧光定量RT-PCR检测Smad4的表达
        1.2.4 细胞转染及RT-PCR检测
        1.2.5 细胞生长曲线测定
        1.2.6 MTT比色实验
        1.2.7 细胞周期检测
        1.2.8 细胞周期相关调控因子检测
        1.2.9 统计学方法
2 结果
    2.1 慢病毒感染后PVT1及Smad4的表达
    2.2 转染Smad4 siRNA后Smad4的表达
    2.3 沉默Smad4对LV/shRNA PVT1介导的鼻咽癌细胞生长的影响
    2.4 沉默Smad4对LV/shRNA PVT1介导的细胞细胞周期分布的影响
    2.5 沉默Smad4对LV/shRNA PVT1介导的细胞周期调控因子表达的影响
3 讨论



本文编号：3192709