Aβ 1-40 多靶点激活REL家族介导RPE细胞损伤后炎症因子分泌及其机制研究
发布时间：2021-06-26 10:12
目的:视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium,RPE）细胞发生退行性病变是年龄性相关性黄斑变性（age related macular degeneration,AMD）的关键病理改变。课题组前期研究提示RPE细胞损伤后,其免疫调节功能受损导致的眼底炎性微环境可能是促进AMD进展的重要机制。新近研究发现,AMD标志性病理沉积物玻璃膜疣（drusen）的重要成分之一淀粉样蛋白β（amyloidβ,Aβ）可能通过介导RPE分泌炎症因子引起炎性微环境。本研究建立Aβ介导的RPE损伤模型,探究Aβ沉积引起炎性微环境的可能机制及靶点。方法:以C57BL/6小鼠为研究对象,采用玻璃体腔注射Aβ1-40建立Aβ相关RPE损伤动物模型,以玻璃体腔注射PBS作为对照组,运用电生理及苏木精—伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色法分别在功能学及形态学方面评估RPE细胞损伤,采用qPCR检测IL-1β、IL-18、IL-12b、IL-8、IL-6及REL家族的转录水平。同时分别在ARPE-19细胞及WT小鼠原代RPE细胞中加入Aβ1...
【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：113 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图2.5年内从早期AMD变为进展期AMD/nvAMD患者的OCT同平面图像变化过程
1.2 结果1.2.1 玻璃体腔注射 Aβ1-40可以穿透视网膜到达 RPE 层为了探究玻璃体腔注射 Aβ1-40是否能穿透视网膜，本研究给小鼠玻璃体腔注射 5μl 浓度为 700μM 寡聚态 Aβ1-40（共 14μg）每眼建模，在建模后的 2 天、4 天分别取小鼠眼球行冰冻切片及免疫荧光，检测 Aβ1-40的分布，发现与 PBS 注射组相比，Aβ1-40注射组的荧光信号明显增强（红色），视网膜各层均有分布，且无论是注射后 2 天还是 4 天 RPE 层上方都可以观察到明显 Aβ 沉积，同时在 Aβ 沉积处可以观察到外核层（outernuclearlayer,ONL）形态异常（图 3A）。进 步本研究探讨这种损伤是否是由于玻璃体腔注射引起的，于是在建模 4 天后行石蜡切片及 HE 染色，在光镜下发现 Aβ1-40注射组视网膜形态异常，结构紊乱，PBS 组视网膜结构正常，未及明显损伤，并且模型组形态异常处与玻璃体腔注射点没有直接关系（图 3B）。
1.2.2 沉积于 RPE 层的 Aβ1-40可以引起视网膜形态及功能异常为了探究 Aβ1-40沉积于 RPE 细胞后是否会对 RPE 细胞形态功能产生影响，本研究取PBS组及造模组的小鼠眼球行透射电镜检测，结果显示Aβ1-40组的RPE细胞形态异常呈梭形，伴有 bruch’s 膜（bruch’s membrane，BrM）和 RPE 基底部皱褶增厚（图 4A）；我们通过 ERG 对视网膜进行功能学检测，在暗适应条件下，以光强为 3.0 cd·s/m2作为刺激条件，以基线到 a 波波谷的距离为 a 波的波幅，a 波波谷至 b 波波峰的距离作为 b 波的波幅，ERG 结果显示 PBS 组小鼠 a波、b 波波幅平均值分别为 72.43±6.59μV、146.30±6.54μV，Aβ1-40组的小鼠 a 波、b 波波幅平均值分别为：51.10±0.30μV、83.07±10.92μV，与 PBS 组相比，Aβ1-40组的电生理波幅发生明显下降（n=4,a 波：P<0.05，b 波：P<0.01）（图 4B），提示 Aβ1-40沉积可以引起视网膜形态异常及功能损伤。
本文编号：3251148
【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：113 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图2.5年内从早期AMD变为进展期AMD/nvAMD患者的OCT同平面图像变化过程
1.2 结果1.2.1 玻璃体腔注射 Aβ1-40可以穿透视网膜到达 RPE 层为了探究玻璃体腔注射 Aβ1-40是否能穿透视网膜，本研究给小鼠玻璃体腔注射 5μl 浓度为 700μM 寡聚态 Aβ1-40（共 14μg）每眼建模，在建模后的 2 天、4 天分别取小鼠眼球行冰冻切片及免疫荧光，检测 Aβ1-40的分布，发现与 PBS 注射组相比，Aβ1-40注射组的荧光信号明显增强（红色），视网膜各层均有分布，且无论是注射后 2 天还是 4 天 RPE 层上方都可以观察到明显 Aβ 沉积，同时在 Aβ 沉积处可以观察到外核层（outernuclearlayer,ONL）形态异常（图 3A）。进 步本研究探讨这种损伤是否是由于玻璃体腔注射引起的，于是在建模 4 天后行石蜡切片及 HE 染色，在光镜下发现 Aβ1-40注射组视网膜形态异常，结构紊乱，PBS 组视网膜结构正常，未及明显损伤，并且模型组形态异常处与玻璃体腔注射点没有直接关系（图 3B）。
1.2.2 沉积于 RPE 层的 Aβ1-40可以引起视网膜形态及功能异常为了探究 Aβ1-40沉积于 RPE 细胞后是否会对 RPE 细胞形态功能产生影响，本研究取PBS组及造模组的小鼠眼球行透射电镜检测，结果显示Aβ1-40组的RPE细胞形态异常呈梭形，伴有 bruch’s 膜（bruch’s membrane，BrM）和 RPE 基底部皱褶增厚（图 4A）；我们通过 ERG 对视网膜进行功能学检测，在暗适应条件下，以光强为 3.0 cd·s/m2作为刺激条件，以基线到 a 波波谷的距离为 a 波的波幅，a 波波谷至 b 波波峰的距离作为 b 波的波幅，ERG 结果显示 PBS 组小鼠 a波、b 波波幅平均值分别为 72.43±6.59μV、146.30±6.54μV，Aβ1-40组的小鼠 a 波、b 波波幅平均值分别为：51.10±0.30μV、83.07±10.92μV，与 PBS 组相比，Aβ1-40组的电生理波幅发生明显下降（n=4,a 波：P<0.05，b 波：P<0.01）（图 4B），提示 Aβ1-40沉积可以引起视网膜形态异常及功能损伤。
本文编号：3251148
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/yank/3251148.html
最近更新
教材专著
