实时荧光PCR检测真菌性角膜炎常见致病菌种方法的建立

发布时间：2017-04-25 00:18

  本文关键词：实时荧光PCR检测真菌性角膜炎常见致病菌种方法的建立，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：实时荧光PCR检测真菌性角膜炎常见致病菌种方法的建立 目的：真菌性角膜炎是一种由致病真菌引发的致盲率很高的眼科常见的角膜感染性疾病，在我国，镰刀菌是真菌性角膜炎最常见致病菌，其中又以茄病镰刀菌、尖孢镰刀菌、串珠镰刀菌为著，本研究旨在建立真菌性角膜炎常见致病菌中茄病镰刀菌、尖孢镰刀菌、串珠镰刀菌的实时荧光PCR检测方法。 方法：通过检索GenBank真菌的COI基因序列，首次设计茄病镰刀菌、尖孢镰刀菌、串珠镰刀菌的种特异性引物，对模板DNA进行倍比稀释，确定反应的灵敏度；使用青霉、烟曲霉、白色念珠菌等真菌进行实时荧光PCR，观察设计引物的特异性。优化实验反应条件，建立了SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR对镰刀菌快速检测的方法。 结果：所设计引物特异性强、敏感性高，可对茄病镰刀菌、尖孢镰刀菌及串珠镰刀菌的靶DNA进行定量分析，该检测方法的灵敏度达1pg级。引物特异性检测实验结果表明，只有与引物对应的目的菌种DNA发生扩增，，产生特异的单峰熔解曲线，其它种属真菌均未发生扩增，表明设计的引物具有良好的种特异性 结论：研究中建立的实时荧光PCR方法能特异、灵敏的检测出临床真菌性角膜炎中三种最常见镰刀菌的感染，为临床镰刀菌感染的诊断提供了一种快速、准确的方法。
【关键词】：实时荧光PCR 真菌性角膜炎 镰刀菌 COI基因
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R772.21
【目录】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-9
• 第一章 前言9-13
• 第二章 材料与方法13-21
• 2.1 材料13-16
• 2.1.1 实验菌株13
• 2.1.2 主要试剂13-14
• 2.1.3 试剂配制14-15
• 2.1.4 主要仪器设备15-16
• 2.2 方法16-21
• 2.2.1 种特异性引物的设计16
• 2.2.2 菌株分离培养、活化16
• 2.2.3 实验菌株 DNA 的提取16-17
• 2.2.4 COI 基因种特异性引物 PCR 反应条件优化17-18
• 2.2.5 COI 基因种特异性引物 PCR 反应扩增18
• 2.2.6 琼脂糖凝胶电泳18-19
• 2.2.7 实时荧光 PCR 反应体系及反应条件19
• 2.2.8 实时荧光 PCR 反应标准曲线的绘制及确定检测的灵敏度19-20
• 2.2.9 实时荧光 PCR 特异性验证20-21
• 第三章 结果21-30
• 3.1 菌种鉴定21-22
• 3.2 COI 基因种特异性引物 PCR 反应条件优化22-24
• 3.3 COI 基因种特异性引物的 PCR 扩增24
• 3.4 实时荧光 PCR 反应标准曲线的绘制及确定检测的灵敏度24-26
• 3.5 实时荧光 PCR 检测的的特异性26-30
• 第四章 讨论30-36
• 第五章 结论36-37
• 参考文献37-40
• 综述40-61
• 参考文献53-61
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果61-62
• 致谢62

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

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本文编号：325263