Cofilin-2在鼻咽癌放射抗拒中的作用及机制研究
发布时间：2021-07-06 12:22
【目的】为明确Cofilin-2基因与鼻咽癌放射抗拒的关系,本研究应用RNA干扰技术构建稳定的Cofilin-2基因沉默CNE-2R细胞模型,通过细胞体内、外的功能学实验探讨沉默Cofilin-2对CNE-2R细胞放射敏感性的影响,明确Cofilin-2是否可以作为预测鼻咽癌放射治疗反应的蛋白标志物及潜在的治疗靶点,并进一步通过人类基因表达谱芯片,测序分析Cofilin-2沉默后引起CNE-2R细胞的基因表达谱的改变,初步探讨Cofilin-2参与鼻咽癌放射抗拒的机制及通路。【方法】1.针对Cofilin-2设计并合成3条干扰靶点,筛选最佳沉默片段进行慢病毒包装转染鼻咽癌CNE-2R细胞,并分选获得稳定沉默Cofilin-2基因的鼻咽癌CNE-2R细胞模型;采用q RT-PCR及Western-blot实验检测其m RNA及蛋白水平的表达情况,验证干扰效果。2.选用转染效果最好的Cofilin2-RNAi-LV3细胞株作为实验组,通过CCK-8法、克隆形成实验、流式细胞术观察沉默Cofilin-2基因后鼻咽癌CNE-2R细胞的增殖,周期分布、凋亡的变化情况,探讨Cofilin-2与鼻咽...
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：132 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
pHelper1.0载体
3.5 RNAi 重组慢病毒转染 CNE-2R 细胞3.5.1 siRNA 靶序列的设计如表 1-2 所示:表 1-2 CFL2-siRNA 序列信息表Table 1-2 CFL2 siRNA sequenceNO. Accession Target Seq CDS GC%CFL2-RNAi(49280-1) NM_021914 TTCGACACTTGGAGAGAAA 142..642 42.1CFL2-RNAi(49281-1) NM_021914 TAGCTCTAAAGATGCCATT 142..642 36.8CFL2-RNAi(49282-1) NM_021914 ATGCCACATACGAAACAAA 142..642 36.83.5.2 慢病毒载体构建包括：pHelper 1. 0 载体及 pHelper 2. 0 载体、载体(如图 1-1、 1-2,、1-3，由上海吉凯公司提供）。
3.5 RNAi 重组慢病毒转染 CNE-2R 细胞3.5.1 siRNA 靶序列的设计如表 1-2 所示:表 1-2 CFL2-siRNA 序列信息表Table 1-2 CFL2 siRNA sequenceNO. Accession Target Seq CDS GC%CFL2-RNAi(49280-1) NM_021914 TTCGACACTTGGAGAGAAA 142..642 42.1CFL2-RNAi(49281-1) NM_021914 TAGCTCTAAAGATGCCATT 142..642 36.8CFL2-RNAi(49282-1) NM_021914 ATGCCACATACGAAACAAA 142..642 36.83.5.2 慢病毒载体构建包括：pHelper 1. 0 载体及 pHelper 2. 0 载体、载体(如图 1-1、 1-2,、1-3，由上海吉凯公司提供）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]β-elemene enhances the radiosensitivity of gastric cancer cells by inhibiting Pak1 activation[J]. Jun-Song Liu,Xiang-Ming Che,Shuai Chang,Guang-Lin Qiu,Shi-Cai He,Lin Fan,Wei Zhao,Zheng-Liang Zhang,Shu-Feng Wang. World Journal of Gastroenterology. 2015(34)
[2]蛋白组学分析放射抗拒性鼻咽癌细胞差异表达蛋白[J]. 王中卫,王亚利,金迎迎,任宏涛. 西安交通大学学报(医学版). 2014(06)
[3]鼻咽癌淋巴结转移相关分子蛋白质组学技术筛选与鉴定[J]. 朱玉亮,刘玉猛,陆小军,贾卫华,洪明晃. 中华肿瘤防治杂志. 2014(17)
[4]血浆cofilin蛋白检测在肺癌诊断中的价值[J]. 郑育举,方晔,李绍金,郑邦希. 南方医科大学学报. 2013(10)
[5]Effect of silencing Bcl-2 expression by small interfering RNA on radiosensitivity of gastric cancer BGC823 cells[J]. Hong-Tao Liu,Chun-Lei Lu. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2013(01)
[6]不同临床类型原发鼻咽癌组织差异表达蛋白[J]. 何迎春,陈艳,廖端芳,何兰,林丽美,范婧莹,田道法. 基础医学与临床. 2012(12)
[7]高转移能力与低转移能力人鼻咽癌细胞株蛋白质组学比较分析[J]. 陈冬平,齐斌. 中华肿瘤防治杂志. 2012(13)
[8]蛋白质组学方法识别nm23-H1为鼻咽癌的转移抑制蛋白和预后因子（英文）[J]. 李雪兵,胡蓉,瞿家权,贺秋艳,陈瑜,李娇阳,叶旭,向亚莉,易红. 中南大学学报(医学版). 2012(01)
[9]EGFR及NF-κB与鼻咽癌放射敏感性的相关性研究[J]. 杨春妮,杨一兵,艾毅钦. 临床耳鼻咽喉头颈外科杂志. 2009(15)
[10]鼻咽癌血清蛋白质双向电泳图谱分析[J]. 李雪华,李欣,徐守军,赵亮,丁彦青. 天津医药. 2008(11)
博士论文
[1]鼻咽癌放射抵抗机制的蛋白质组学研究[D]. 章华.中南大学 2007
硕士论文
[1]采用定量蛋白质组学技术筛选鼻咽癌转移相关甲基化失活基因[D]. 崔发财.中南大学 2012
[2]采用蛋白质组学技术筛选鼻咽癌转移相关蛋白[D]. 陈丽霞.广西医科大学 2009
[3]血清蛋白质谱分析在鼻咽癌中的初步研究[D]. 倪晓雷.福建医科大学 2008
[4]鼻咽癌血清比较蛋白质组学研究[D]. 李雪华.第一军医大学 2004
本文编号：3268234
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：132 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
pHelper1.0载体
3.5 RNAi 重组慢病毒转染 CNE-2R 细胞3.5.1 siRNA 靶序列的设计如表 1-2 所示:表 1-2 CFL2-siRNA 序列信息表Table 1-2 CFL2 siRNA sequenceNO. Accession Target Seq CDS GC%CFL2-RNAi(49280-1) NM_021914 TTCGACACTTGGAGAGAAA 142..642 42.1CFL2-RNAi(49281-1) NM_021914 TAGCTCTAAAGATGCCATT 142..642 36.8CFL2-RNAi(49282-1) NM_021914 ATGCCACATACGAAACAAA 142..642 36.83.5.2 慢病毒载体构建包括：pHelper 1. 0 载体及 pHelper 2. 0 载体、载体(如图 1-1、 1-2,、1-3，由上海吉凯公司提供）。
3.5 RNAi 重组慢病毒转染 CNE-2R 细胞3.5.1 siRNA 靶序列的设计如表 1-2 所示:表 1-2 CFL2-siRNA 序列信息表Table 1-2 CFL2 siRNA sequenceNO. Accession Target Seq CDS GC%CFL2-RNAi(49280-1) NM_021914 TTCGACACTTGGAGAGAAA 142..642 42.1CFL2-RNAi(49281-1) NM_021914 TAGCTCTAAAGATGCCATT 142..642 36.8CFL2-RNAi(49282-1) NM_021914 ATGCCACATACGAAACAAA 142..642 36.83.5.2 慢病毒载体构建包括：pHelper 1. 0 载体及 pHelper 2. 0 载体、载体(如图 1-1、 1-2,、1-3，由上海吉凯公司提供）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]β-elemene enhances the radiosensitivity of gastric cancer cells by inhibiting Pak1 activation[J]. Jun-Song Liu,Xiang-Ming Che,Shuai Chang,Guang-Lin Qiu,Shi-Cai He,Lin Fan,Wei Zhao,Zheng-Liang Zhang,Shu-Feng Wang. World Journal of Gastroenterology. 2015(34)
[2]蛋白组学分析放射抗拒性鼻咽癌细胞差异表达蛋白[J]. 王中卫,王亚利,金迎迎,任宏涛. 西安交通大学学报(医学版). 2014(06)
[3]鼻咽癌淋巴结转移相关分子蛋白质组学技术筛选与鉴定[J]. 朱玉亮,刘玉猛,陆小军,贾卫华,洪明晃. 中华肿瘤防治杂志. 2014(17)
[4]血浆cofilin蛋白检测在肺癌诊断中的价值[J]. 郑育举,方晔,李绍金,郑邦希. 南方医科大学学报. 2013(10)
[5]Effect of silencing Bcl-2 expression by small interfering RNA on radiosensitivity of gastric cancer BGC823 cells[J]. Hong-Tao Liu,Chun-Lei Lu. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2013(01)
[6]不同临床类型原发鼻咽癌组织差异表达蛋白[J]. 何迎春,陈艳,廖端芳,何兰,林丽美,范婧莹,田道法. 基础医学与临床. 2012(12)
[7]高转移能力与低转移能力人鼻咽癌细胞株蛋白质组学比较分析[J]. 陈冬平,齐斌. 中华肿瘤防治杂志. 2012(13)
[8]蛋白质组学方法识别nm23-H1为鼻咽癌的转移抑制蛋白和预后因子（英文）[J]. 李雪兵,胡蓉,瞿家权,贺秋艳,陈瑜,李娇阳,叶旭,向亚莉,易红. 中南大学学报(医学版). 2012(01)
[9]EGFR及NF-κB与鼻咽癌放射敏感性的相关性研究[J]. 杨春妮,杨一兵,艾毅钦. 临床耳鼻咽喉头颈外科杂志. 2009(15)
[10]鼻咽癌血清蛋白质双向电泳图谱分析[J]. 李雪华,李欣,徐守军,赵亮,丁彦青. 天津医药. 2008(11)
博士论文
[1]鼻咽癌放射抵抗机制的蛋白质组学研究[D]. 章华.中南大学 2007
硕士论文
[1]采用定量蛋白质组学技术筛选鼻咽癌转移相关甲基化失活基因[D]. 崔发财.中南大学 2012
[2]采用蛋白质组学技术筛选鼻咽癌转移相关蛋白[D]. 陈丽霞.广西医科大学 2009
[3]血清蛋白质谱分析在鼻咽癌中的初步研究[D]. 倪晓雷.福建医科大学 2008
[4]鼻咽癌血清比较蛋白质组学研究[D]. 李雪华.第一军医大学 2004
本文编号：3268234
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/yank/3268234.html
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