PEDF对氧化应激损伤下视网膜色素上皮细胞中UCP2表达的影响

发布时间：2021-07-12 04:38

　　目的初步研究色素上皮衍生因子（Pigment epithelium-derived factor,PEDF）对氧化应激损伤下视网膜色素上皮细胞（adult retinal pigment epithelial-19,ARPE-19）中解偶联蛋白2（the uncoupling protein 2,UCP2）表达的影响。方法将ARPE-19细胞分为不同浓度H₂O₂（0,75,150和200μmol/L）氧化应激损伤组,持续损伤24小时。保护组使用上述不同浓度H₂O₂损伤时,同时加入200ng/ml PEDF处理24小时。利用活细胞实时检测仪,CCK-8实验,LDH释放法及PI染色法测定细胞生长曲线及细胞活力,并对不同浓度损伤组及PEDF保护组中的细胞进行UCP2免疫荧光标记。利用RT-PCR及Real-Time PCR检测ARPE-19细胞中UCP2 mRNA表达情况并作半定量分析,同时检测150μM H₂O₂损伤下ARPE-19不同代数细胞内凋亡基因cas... 

【文章来源】：西安医学院陕西省

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

不同浓度HO损伤下的ARPE-19细胞的生长曲线

显微镜观察细胞形态，结果显示伴随H O 浓度的增加，细胞形态皱缩且凋亡数目增加，但PEDF处理后，显著减少了氧化应激损伤下凋亡细胞的数量，细胞形态较氧化损伤组中胞质饱满，且基本呈长梭型（图2）。图 1 不同浓度 H O 损伤下的 ARPE-19 细胞的生长曲线注释：cell index 细胞生长指数，反应细胞活力。通过 xCell-igence RTCADP 仪器检测 ARPE-19 细胞生长曲线并利用不同浓度 H O (0,50,75,150,200,300 和 500μM）处理 24 小时。 随着 H O 浓度增加，细胞死亡和皱缩细胞数目增加（p <0.05，n = 6）。 最终选择 H O 的处理浓度为（0,75,150 和 200μM）。 * p <0.05 表示与 0μM H O 组相比，具有统计学差异。

细胞生长曲线结果表示随着H O 浓度增加，细胞活性逐渐下降，细胞生长指数明显降低。当H O 浓度为75μM和150μM时加入PEDF处理后，其细胞活性明显增加，分别为25%(±4.5) 和75%(±5.2)（图3A/ B）。当H O 浓度为200μM时，两组细胞间未发现明显统计学差异（图3C）。同时发现PEDF处理组与未处理组两组细胞的存活率有显著的统计学差异（p<0.05）。利用CCK-8实验来验证这一结果，如图3D所示，PEDF能够有效地保护细胞免受H O 诱导的细胞死亡，但是PEDF的保护作用在不同浓度H O 处理组间比较未发现明显变化（p>0.05）。

【参考文献】：
期刊论文
[1]渗出性老年黄斑变性视力性质分析[J]. 邱峰,陶军,王雅文,仝慧娟.  中国实用眼科杂志. 2014 (07)
[2]老年黄斑变性的患病情况[J]. 曹翠萍,王菡,任广运,刘志刚.  中国老年学杂志. 2013(08)



本文编号：3279218