衰老标记蛋白30对人晶状体上皮细胞株SRA01/04增殖和凋亡的影响
发布时间：2021-07-16 20:09
目的:观察调控衰老标记蛋白30（Senescence Marker Protein 30,SMP30）含量的改变对人晶状体上皮细胞株（Human Lens Epithelial Cells,HLEC）SRA01/04增殖和凋亡的影响,为白内障病因和预防机制的研究提供新的思路。方法:（1）预感染实验确定SRA01/04细胞是否易于被慢病毒感染及其最佳感染条件:将处于对数生长期的SRA01/04细胞按2×103/孔的密度接种96孔板,待细胞密度增至20%时,用慢病毒GV115-NC（pGcsil-004）在四种培养液（完全培养基、含5μg/ml助感染试剂的完全培养基、感染增强液、含5μg/ml助感染试剂的感染增强液）及三种复感染指数（1、10、100）的培养条件下感染SRA01/04细胞,每组三个样本、所有实验至少重复三次。（2）SMP30过表达和沉默稳定株构建:确定好感染条件和最佳病毒滴度后,将处于对数生长期的SRA01/04细胞按5×104/孔接种6孔板,待细胞密度增至20%时采用两组RGN（Regucalcin,SMP30）慢病毒LV-RG...
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
人晶状体上皮细胞SRA01/04按2×103/孔均匀接种96孔板，使用细胞计数CCK-8法在贴壁后第1天、2天、3天、4天、5天检测细胞活力，绘制增殖曲线
图 1-2 用含体积分数为 10%胎牛血清的 1640 培养基，在 37℃、含 5%CO2的细胞培养箱内培体上皮细胞 SRA01/04，光镜下观察细胞均匀贴壁生长，形态呈梭形或多边形，细胞核较黑较间隙明显，细胞质均匀。Figure1-2 The human lens epithelial cells SRA01/04 were cultured in a 1640 medium containingl bovine serum at 37°C in a 5% CO2incubator. The adherent growth of the cells was observed t microscope. Shape or polygon, the nucleus is black, the cell gap is obvious, and the cytoplaform.2 慢病毒感染 SRA01/04 细胞通过预感染实验，我们确定了 SRA01/04 细胞最佳感染条件rmal+Polybrene（5μ g/ml）（即完全培养基+5μ g/ml 的助感染试剂），5（即病毒数量与细胞总数之比为 5:1），在此条件下感染细胞状态较绿色荧光的细胞融合率为 80%左右（图 2-1）。
图 2-2 100X:放大率为 100 倍;B.jpg:光镜视野;G.jpg:绿色荧光显微镜视野;CON:正常对照组细；NC-OE:SMP30 过表达阴性对照组细胞；OE：SMP30 过表达组细胞；NC-KD:SMP30 沉默阴性对照组胞； KD:SMP30 沉默组细胞。Figure 2-2 100X: Magnification 100; B.jpg: Light microscope field of view; G.jpg: Green fluorescenceicroscopy field of view; CON: Normal control group cells; NC-OE: SMP30 overexpression negativeontrol group cells; OE: SMP30 overexpression group cells; NC-KD: SMP30 knock down negative controlroup cells; KD: SMP30 knock down group cells.
【参考文献】：
期刊论文
[1]高钙状态对人晶状体上皮细胞株SRA01/04氧化应激水平的影响[J]. 陈曦,韩子豪,李舒凝,李松蔓,李艳玮,梁皓. 眼科新进展. 2017(10)
[2]β淀粉样蛋白与年龄相关性白内障[J]. 郑天玉,徐婕,卢奕. 中国眼耳鼻喉科杂志. 2017(05)
[3]白内障患者房水中淀粉样蛋白含量及其与年龄的相关性研究[J]. 李臻,张健,蒋慧中,卢艳. 眼科. 2017(04)
[4]过氧化氢诱导的急性氧化应激对人晶状体上皮细胞形态、生存率及衰老标记蛋白30（SMP30）表达的影响[J]. 李舒凝,陈曦,张鸿侃,蒋林志,梁皓,谭少健. 眼科新进展. 2017(04)
[5]Aquaporin-1 down regulation associated with inhibiting cell viability and inducing apoptosis of human lens epithelial cells[J]. Hong-Hua Zheng,Guo-Xing Xu,Jian Guo,Li-Cheng Fu,Yao Yao. International Journal of Ophthalmology. 2016(01)
[6]CXCR4慢病毒表达载体的构建及细胞转染[J]. 段司沁,范遥,赵雪,曹园芝,谭毅,龙北国,马伟峰. 实用医学杂志. 2015(17)
[7]衰老标记蛋白30在不同年龄白内障患者晶状体上皮细胞中的表达变化[J]. 赖伟霞,谭少健,李霞,邹文进,蒋林志,梁皓. 中华实验眼科杂志. 2014 (06)
[8]晶状体蛋白与年龄相关性白内障研究进展[J]. 姚瑶,徐国兴. 国际眼科杂志. 2014(02)
[9]白内障晶状体的蛋白质组学研究进展[J]. 孙亮,李军花,倪茂巍,朱忠欣,丛维涛,金利泰. 中国医药生物技术. 2012(05)
[10]糖尿病性白内障和年龄相关性白内障晶状体蛋白质组学的差异分析[J]. 禹倩倩,姚勇,储兆东,陶永辉,邵珺,黄玉政. 中华实验眼科杂志. 2012 (06)
本文编号：3287679
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
人晶状体上皮细胞SRA01/04按2×103/孔均匀接种96孔板，使用细胞计数CCK-8法在贴壁后第1天、2天、3天、4天、5天检测细胞活力，绘制增殖曲线
图 1-2 用含体积分数为 10%胎牛血清的 1640 培养基，在 37℃、含 5%CO2的细胞培养箱内培体上皮细胞 SRA01/04，光镜下观察细胞均匀贴壁生长，形态呈梭形或多边形，细胞核较黑较间隙明显，细胞质均匀。Figure1-2 The human lens epithelial cells SRA01/04 were cultured in a 1640 medium containingl bovine serum at 37°C in a 5% CO2incubator. The adherent growth of the cells was observed t microscope. Shape or polygon, the nucleus is black, the cell gap is obvious, and the cytoplaform.2 慢病毒感染 SRA01/04 细胞通过预感染实验，我们确定了 SRA01/04 细胞最佳感染条件rmal+Polybrene（5μ g/ml）（即完全培养基+5μ g/ml 的助感染试剂），5（即病毒数量与细胞总数之比为 5:1），在此条件下感染细胞状态较绿色荧光的细胞融合率为 80%左右（图 2-1）。
图 2-2 100X:放大率为 100 倍;B.jpg:光镜视野;G.jpg:绿色荧光显微镜视野;CON:正常对照组细；NC-OE:SMP30 过表达阴性对照组细胞；OE：SMP30 过表达组细胞；NC-KD:SMP30 沉默阴性对照组胞； KD:SMP30 沉默组细胞。Figure 2-2 100X: Magnification 100; B.jpg: Light microscope field of view; G.jpg: Green fluorescenceicroscopy field of view; CON: Normal control group cells; NC-OE: SMP30 overexpression negativeontrol group cells; OE: SMP30 overexpression group cells; NC-KD: SMP30 knock down negative controlroup cells; KD: SMP30 knock down group cells.
【参考文献】：
期刊论文
[1]高钙状态对人晶状体上皮细胞株SRA01/04氧化应激水平的影响[J]. 陈曦,韩子豪,李舒凝,李松蔓,李艳玮,梁皓. 眼科新进展. 2017(10)
[2]β淀粉样蛋白与年龄相关性白内障[J]. 郑天玉,徐婕,卢奕. 中国眼耳鼻喉科杂志. 2017(05)
[3]白内障患者房水中淀粉样蛋白含量及其与年龄的相关性研究[J]. 李臻,张健,蒋慧中,卢艳. 眼科. 2017(04)
[4]过氧化氢诱导的急性氧化应激对人晶状体上皮细胞形态、生存率及衰老标记蛋白30（SMP30）表达的影响[J]. 李舒凝,陈曦,张鸿侃,蒋林志,梁皓,谭少健. 眼科新进展. 2017(04)
[5]Aquaporin-1 down regulation associated with inhibiting cell viability and inducing apoptosis of human lens epithelial cells[J]. Hong-Hua Zheng,Guo-Xing Xu,Jian Guo,Li-Cheng Fu,Yao Yao. International Journal of Ophthalmology. 2016(01)
[6]CXCR4慢病毒表达载体的构建及细胞转染[J]. 段司沁,范遥,赵雪,曹园芝,谭毅,龙北国,马伟峰. 实用医学杂志. 2015(17)
[7]衰老标记蛋白30在不同年龄白内障患者晶状体上皮细胞中的表达变化[J]. 赖伟霞,谭少健,李霞,邹文进,蒋林志,梁皓. 中华实验眼科杂志. 2014 (06)
[8]晶状体蛋白与年龄相关性白内障研究进展[J]. 姚瑶,徐国兴. 国际眼科杂志. 2014(02)
[9]白内障晶状体的蛋白质组学研究进展[J]. 孙亮,李军花,倪茂巍,朱忠欣,丛维涛,金利泰. 中国医药生物技术. 2012(05)
[10]糖尿病性白内障和年龄相关性白内障晶状体蛋白质组学的差异分析[J]. 禹倩倩,姚勇,储兆东,陶永辉,邵珺,黄玉政. 中华实验眼科杂志. 2012 (06)
本文编号：3287679
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