一个非综合征型视网膜色素变性家系致病基因的鉴定

发布时间：2017-04-27 02:13

  本文关键词：一个非综合征型视网膜色素变性家系致病基因的鉴定，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：视网膜色素变性(Retinitis Pigmentosa, RP)是一类最常见的遗传性视网膜营养不良症,由视网膜感光细胞(包括视杆细胞和视锥细胞)或色素上皮细胞进行性退化而导致视力进行性损失,中国人群的发病率可达1/1000。其发病机制很复杂,涉及多种不同的生物代谢途径。RP临床上主要分为综合征型及非综合征型两类,其中非综合征型视网膜色素变性(Nonsyndromic retinitis pigmentosa, NSRP)占65%,其散发比例高达42%。RP遗传方式异常复杂,除了具有典型的孟德尔遗传方式外,还存在一些罕见的非典型遗传模式。此外,RP具有高度的临床异质性与遗传异质性,目前至少存在65个致病基因,但仍有约40%的RP患者致病原因未知。 目的：对我室至今遗传诊断未明确的一个NSRP家系进行遗传学分析,以明确其致病原因及发病机制,并对家系的患者及其他成员提供遗传咨询及生育指导,防止出生缺陷。 方法： 1、在我室前期遗传学分析的基础上,对该家系的1名患者进行进一步的目标基因筛查,选取近年来新发现的2个常染色体显性RP致病基因：SNRNP200及KLHL7基因,对这2个基因的外显子及其侧翼序列进行PCR加Sanger测序分析； 2、对该家系的1名患者进行多重连接探针扩增技术(MLPA)分析,以明确RHO、RP1、IMPDH1、PRPF31、RP2及RPGR这些RP已知致病基因外显子的大片段缺失或重复突变； 3、对该家系的2名患者进行外显子组测序,并结合生物信息学分析以明确该RP家系潜在的致病原因。 结果： 1.Sanger测序分析发现该家系患者SNRNP200及KLHL7基因编码区不存在微小致病突变； 2.MePA分析发现该家系患者不存在上述RP已知致病基因外显子的大片段缺失或重复突变； 3、联合外显子组测序及生物信息学分析发现APoE基因存在c.784GA(p.Glu262Lys)及c.787GA(p.Glu263Lys)2个杂合突变,且这2个突变位于同一条染色体上,为APOE基因罕见突变体ApoE7-Suita.该突变体在该家系中与疾病表型共分离,且在200个正常对照中未被发现。此外,还发现该家系所有患者均存在PDE6B基因c.2030CA杂合突变,但该突变在家系内与疾病表型不共分离。 结论： 1、本研究通过Sanger测序排除了该家系存在SNRNP200及KLHL7基因编码区的微小致病突变,以及通过MLPA分析排除了存在RHO、RP1、IMPDH1、PRPF31、RPGR及RP2基因外显子的大片段缺失与重复突变。 2、本研究联合外显子组测序及生物信息学分析,首次发现1个APOE基因罕见突变体与RP疾病表型共分离,推测APOE基因突变可能与RP的发病相关。 3、本研究发现该家系患者均携带已知隐性RP致病基因PDE6B基因c.2030CA杂合突变,不排除该基因与APOE基因共同作用导致RP的可能。
【关键词】：非综合征型视网膜色素变性 Sanger测序 MLPA 外显子组测序 APOE基因
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R774.1
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 主要实验仪器、试剂与耗材10-13
• 英文缩略词简表13-14
• 前言14-17
• 一、研究对象17-20
• 1.1 家系资料17
• 1.2 眼科检查结果17-20
• 二、遗传学分析策略20-21
• 三、研究方法21-40
• 3.1 外周血gDNA提取21-22
• 3.2 NSRP相关基因的测序分析22-25
• 3.3 NSRP相关基因的MLPA分析25-28
• 3.4 NSRP外显子组测序分析28-40
• 四、实验结果40-54
• 4.1 NSRP相关基因测序分析的结果40
• 4.2 MLPA分析的结果40-42
• 4.3 外显子组测序分析的结果42-54
• 五、讨论54-60
• 5.1 外显子组测序在RP遗传诊断中的应用54-55
• 5.2 APOE基因与RP的相关性55-57
• 5.3 RP与非典型孟德尔遗传现象57-58
• 5.4 外显子组测序鉴定的共分离基因与连锁分析定位区间之间误差的分析58-59
• 5.5 本研究有待进一步探索的内容59-60
• 六、结论60-61
• 参考文献61-65
• 综述65-88
• 参考文献79-88
• 个人简历88-89
• 致谢89

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本文编号：329725