Dll4/Notch信号通路在脉络膜新生血管生成中的作用机制研究

发布时间：2021-08-13 07:09

　　研究背景脉络膜新生血管（choroidal neovascularization, CNV）,包括血管发生和血管生成过程,是多种可造成严重不可逆视力丧失的视网膜疾病的共同病理基础。在近几十年的努力中,对于CNV的病理生理机制和防治策略的研究已经取得了不少成绩。然而,CNV的发展是一个非常复杂的动态过程。对于其发生发展的具体机制仍然知之甚少。Delta样配体4（Delta-like ligand 4, Dll4）是Notch信号系统家族在哺乳动物细胞中的配体之一,特异性的表达于生理性和病理性的血管系。值得注意的是,小鼠基因敲除的研究中发现,单一Dll4等位基因缺失便会由于血管系统的发育障碍而导致小鼠胚胎期死亡。到目前为止,已知的仅有两个血管发育相关基因,Dll4和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）,具有半剂量等位基因致死效应,表明其在血管发生及生成过程中发挥着关键作用。以往的研究中发现,缺氧诱导因子1（hypoxia inducible factor 1,HIF- 1）对于调控视网膜色素上皮（retinal pigment ... 

【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：111 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

载体质粒pShuttle-CMV以及表达质粒pShuttle-CMV-hDll4

G．室温复温后，PBS 清洗，5min × 3 次，加入 PBS 稀释二抗（CY3 标记兔抗羊 IgG 1：200）孵育，室温 1 小时，PBS 清洗，5min × 3 次；H．DAPI 衬染细胞核，室温 5min，PBS 清洗，5min × 3 次；I．1：1 甘油/PBS 封片，荧光显微镜下观察，照相。（以 0.01 mol PBS 替代一抗作为空白对照，以正常羊血清(1:50)替代一抗作为替代对照，行平行染色。）2.6 非接触共培养体系观察缺氧条件下 RPE 细胞诱导不同 Dll4表达水平的 RF/6A 细胞功能的变化设计三种模拟体内RPE细胞与CEC之间自然关系的共培养模型分别对缺氧条件下受 RPE 细胞诱导的不同 Dll4 表达水平 RF/6A 细胞的增生、侵袭以及管腔形成能力进行分析（图 1-2）。

图 1-3 RPE-RF/6A 接触共培养模型。体步骤如下：4个 RPE 细胞接种在 Transwell 小室背面培养 6 小时后贴壁层；各实验分组进行转染的 RF/6A 细胞预处理培养 24 小时，用腺病毒继续感染细胞 24 小时，将 5×104个 GFP 标记的 RF背面已形成 RPE 细胞层的 Transwell 小室内；孔板内预先以 1×105/ cm2的密度接种 RPE 细胞，培养贴壁缺氧 12 小时使底层形成化学趋化力，应用接触共培养模型孔内； 4 小时后，将小室取出，以棉签拭去小室内底面滤膜上的内涤，5min × 3 次；

【参考文献】：
期刊论文
[1]Notch-Dll4在激光诱导的大鼠脉络膜新生血管生成中的作用[J]. 马可,李晓,王雨生,叶子,蔡岩.  眼科新进展. 2010(05)
[2]Delta样配体4-Notch信号在眼底血管发育和新生血管生成中的作用[J]. 窦国睿,王雨生.  中华眼底病杂志. 2009 (02)
[3]生长因子在脉络膜新生血管生成的微环境中的多重作用[J]. 窦国睿,王雨生.  眼科新进展. 2006(09)
[4]VEGF诱导人脐静脉内皮细胞体外三维成型和对EphrinB2/EphB4表达的影响[J]. 党涛,卞修武,赵雯,戴超,蒋雪峰.  第三军医大学学报. 2006(10)
[5]血管内皮生长因子诱发脉络膜新生血管的分子机制[J]. 侯慧媛,王雨生.  中华眼底病杂志. 2005(06)
[6]脉络膜新生血管的生成和抑制[J]. 朱洁,王雨生,惠延年.  眼科新进展. 2004(01)



本文编号：3339986