建立稳定表达融合自杀基因CD/UPRT.UL49的CNE-2鼻咽癌细胞株
发布时间：2021-09-09 10:14
目的:建立稳定表达融合自杀基因CD/UPRT.UL49的CNE-2鼻咽癌细胞株。方法:构建表达载体pcDNA3.1（-）E6.BARF1p.CD/UPRT.UL49,经脂质体法转染CNE-2细胞,G418和前体药物5-氟胞嘧啶筛选出阳性克隆细胞并扩大培养。抽提阳性克隆细胞总蛋白质,Western-blotting检测目的基因表达。结果:融合自杀基因CD/UPRT.UL49在CNE-2转染细胞内稳定表达。结论:本组通过脂质体转染技术,成功地建立了稳定表达融合CD/UPRT.UL49基因的CNE-2细胞株。
【文章来源】：临床耳鼻咽喉头颈外科杂志. 2014,28(03)北大核心
【文章页数】：4 页
【部分图文】：
图１融合启动子Ｅ６．ＢＡＲＦ１ｐ的测序图谱
临床耳鼻咽喉头颈外科杂志第２８卷图１融合启动子Ｅ６．ＢＡＲＦ１ｐ的测序图谱图２目的基因序列ＣＤ／ＵＰＲＴ．ＵＬ４９的测序图谱图３ＣＮＥ－２细胞中融合蛋白ＣＤ／ＵＰＲＴ．ＵＬ４９的Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔｔｉｎｇ图３讨论将基因治疗与放射治疗结合，可以增加鼻咽癌的放射敏感性、提高放射疗效、降低放射线的使用剂量，尤以自杀基因ＣＤ／ＵＰＲＴ效果显著。胞嘧啶脱氨酶（ｃｙｔｏｓｉｎｅｄｅａｍｉｎａｓｅ，ＣＤ）将５－ＦＣ转化为有毒的５－ＦＵ，随后形成５＇－氟尿苷酸（５′－ｆｌｕｏｒｏｕｒｉｄｉｎｅｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ，５－ＦｕＴＰ）或５′－氟脱氧尿苷酸（５＇－ｆｌｕｏｒｏｄｅｏｘｙｕｒｉｄｙｌａｔｅ，５－ＦｄｕＴＰ），前者可以整合到ＲＮＡ，干扰ＲＮＡ合成；后者抑制腺苷酸合成酶，干扰ＤＮＡ的合成，导致细胞死亡〔１〕。ＵＰＲＴ基因的产物则能直接将５－ＦＵ转化为５－ＦｕＭＰ，然后转化为５－ＦｄｕＭＰ和５－ＦｕＴＰ，从而减少了多种竞争酶对５－ＦＵ的降解〔２〕。基于尿嘧啶磷酸核糖基转移酶（ｕｒａｃｉｌｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓ，ＵＰＲＴ）能明显增强肿瘤细胞对５－ＦＵ的敏感性，ＣＤ和ＵＰＲＴ共表达时则可能产生杀伤肿瘤细胞的协同效应。然而如能进一步提高肿瘤的瘤内转染效率，增加基因转染的靶向性，如ＥＢ病毒编码的潜伏膜蛋白－１的调控序列来调节自杀基因的肿瘤特异性表达〔３－４〕，进行鼻咽癌放射－基因治疗，可望有更好的临床应用前景。因此，深入探讨如何增
临床耳鼻咽喉头颈外科杂志第２８卷图１融合启动子Ｅ６．ＢＡＲＦ１ｐ的测序图谱图２目的基因序列ＣＤ／ＵＰＲＴ．ＵＬ４９的测序图谱图３ＣＮＥ－２细胞中融合蛋白ＣＤ／ＵＰＲＴ．ＵＬ４９的Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔｔｉｎｇ图３讨论将基因治疗与放射治疗结合，可以增加鼻咽癌的放射敏感性、提高放射疗效、降低放射线的使用剂量，尤以自杀基因ＣＤ／ＵＰＲＴ效果显著。胞嘧啶脱氨酶（ｃｙｔｏｓｉｎｅｄｅａｍｉｎａｓｅ，ＣＤ）将５－ＦＣ转化为有毒的５－ＦＵ，随后形成５＇－氟尿苷酸（５′－ｆｌｕｏｒｏｕｒｉｄｉｎｅｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ，５－ＦｕＴＰ）或５′－氟脱氧尿苷酸（５＇－ｆｌｕｏｒｏｄｅｏｘｙｕｒｉｄｙｌａｔｅ，５－ＦｄｕＴＰ），前者可以整合到ＲＮＡ，干扰ＲＮＡ合成；后者抑制腺苷酸合成酶，干扰ＤＮＡ的合成，导致细胞死亡〔１〕。ＵＰＲＴ基因的产物则能直接将５－ＦＵ转化为５－ＦｕＭＰ，然后转化为５－ＦｄｕＭＰ和５－ＦｕＴＰ，从而减少了多种竞争酶对５－ＦＵ的降解〔２〕。基于尿嘧啶磷酸核糖基转移酶（ｕｒａｃｉｌｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓ，ＵＰＲＴ）能明显增强肿瘤细胞对５－ＦＵ的敏感性，ＣＤ和ＵＰＲＴ共表达时则可能产生杀伤肿瘤细胞的协同效应。然而如能进一步提高肿瘤的瘤内转染效率，增加基因转染的靶向性，如ＥＢ病毒编码的潜伏膜蛋白－１的调控序列来调节自杀基因的肿瘤特异性表达〔３－４〕，进行鼻咽癌放射－基因治疗，可望有更好的临床应用前景。因此，深入探讨如何增
【参考文献】：
期刊论文
[1]BARF1基因的启动子活性及其在鼻咽癌细胞中肿瘤特异性分析研究[J]. 卿菁,赵素萍,蒋卫红,章华. 现代实用医学. 2013(05)
[2]靶向性质粒表达载体pcDNA3.1（-）CMV·Egr-1CDglyTK的构建及转染研究[J]. 唐瑶云,肖健云,赵素萍,唐爱发,夏昆,陈主初. 中国耳鼻咽喉颅底外科杂志. 2003(01)
本文编号：3391913
【文章来源】：临床耳鼻咽喉头颈外科杂志. 2014,28(03)北大核心
【文章页数】：4 页
【部分图文】：
图１融合启动子Ｅ６．ＢＡＲＦ１ｐ的测序图谱
临床耳鼻咽喉头颈外科杂志第２８卷图１融合启动子Ｅ６．ＢＡＲＦ１ｐ的测序图谱图２目的基因序列ＣＤ／ＵＰＲＴ．ＵＬ４９的测序图谱图３ＣＮＥ－２细胞中融合蛋白ＣＤ／ＵＰＲＴ．ＵＬ４９的Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔｔｉｎｇ图３讨论将基因治疗与放射治疗结合，可以增加鼻咽癌的放射敏感性、提高放射疗效、降低放射线的使用剂量，尤以自杀基因ＣＤ／ＵＰＲＴ效果显著。胞嘧啶脱氨酶（ｃｙｔｏｓｉｎｅｄｅａｍｉｎａｓｅ，ＣＤ）将５－ＦＣ转化为有毒的５－ＦＵ，随后形成５＇－氟尿苷酸（５′－ｆｌｕｏｒｏｕｒｉｄｉｎｅｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ，５－ＦｕＴＰ）或５′－氟脱氧尿苷酸（５＇－ｆｌｕｏｒｏｄｅｏｘｙｕｒｉｄｙｌａｔｅ，５－ＦｄｕＴＰ），前者可以整合到ＲＮＡ，干扰ＲＮＡ合成；后者抑制腺苷酸合成酶，干扰ＤＮＡ的合成，导致细胞死亡〔１〕。ＵＰＲＴ基因的产物则能直接将５－ＦＵ转化为５－ＦｕＭＰ，然后转化为５－ＦｄｕＭＰ和５－ＦｕＴＰ，从而减少了多种竞争酶对５－ＦＵ的降解〔２〕。基于尿嘧啶磷酸核糖基转移酶（ｕｒａｃｉｌｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓ，ＵＰＲＴ）能明显增强肿瘤细胞对５－ＦＵ的敏感性，ＣＤ和ＵＰＲＴ共表达时则可能产生杀伤肿瘤细胞的协同效应。然而如能进一步提高肿瘤的瘤内转染效率，增加基因转染的靶向性，如ＥＢ病毒编码的潜伏膜蛋白－１的调控序列来调节自杀基因的肿瘤特异性表达〔３－４〕，进行鼻咽癌放射－基因治疗，可望有更好的临床应用前景。因此，深入探讨如何增
临床耳鼻咽喉头颈外科杂志第２８卷图１融合启动子Ｅ６．ＢＡＲＦ１ｐ的测序图谱图２目的基因序列ＣＤ／ＵＰＲＴ．ＵＬ４９的测序图谱图３ＣＮＥ－２细胞中融合蛋白ＣＤ／ＵＰＲＴ．ＵＬ４９的Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔｔｉｎｇ图３讨论将基因治疗与放射治疗结合，可以增加鼻咽癌的放射敏感性、提高放射疗效、降低放射线的使用剂量，尤以自杀基因ＣＤ／ＵＰＲＴ效果显著。胞嘧啶脱氨酶（ｃｙｔｏｓｉｎｅｄｅａｍｉｎａｓｅ，ＣＤ）将５－ＦＣ转化为有毒的５－ＦＵ，随后形成５＇－氟尿苷酸（５′－ｆｌｕｏｒｏｕｒｉｄｉｎｅｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ，５－ＦｕＴＰ）或５′－氟脱氧尿苷酸（５＇－ｆｌｕｏｒｏｄｅｏｘｙｕｒｉｄｙｌａｔｅ，５－ＦｄｕＴＰ），前者可以整合到ＲＮＡ，干扰ＲＮＡ合成；后者抑制腺苷酸合成酶，干扰ＤＮＡ的合成，导致细胞死亡〔１〕。ＵＰＲＴ基因的产物则能直接将５－ＦＵ转化为５－ＦｕＭＰ，然后转化为５－ＦｄｕＭＰ和５－ＦｕＴＰ，从而减少了多种竞争酶对５－ＦＵ的降解〔２〕。基于尿嘧啶磷酸核糖基转移酶（ｕｒａｃｉｌｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓ，ＵＰＲＴ）能明显增强肿瘤细胞对５－ＦＵ的敏感性，ＣＤ和ＵＰＲＴ共表达时则可能产生杀伤肿瘤细胞的协同效应。然而如能进一步提高肿瘤的瘤内转染效率，增加基因转染的靶向性，如ＥＢ病毒编码的潜伏膜蛋白－１的调控序列来调节自杀基因的肿瘤特异性表达〔３－４〕，进行鼻咽癌放射－基因治疗，可望有更好的临床应用前景。因此，深入探讨如何增
【参考文献】：
期刊论文
[1]BARF1基因的启动子活性及其在鼻咽癌细胞中肿瘤特异性分析研究[J]. 卿菁,赵素萍,蒋卫红,章华. 现代实用医学. 2013(05)
[2]靶向性质粒表达载体pcDNA3.1（-）CMV·Egr-1CDglyTK的构建及转染研究[J]. 唐瑶云,肖健云,赵素萍,唐爱发,夏昆,陈主初. 中国耳鼻咽喉颅底外科杂志. 2003(01)
本文编号：3391913
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