Microglia/NLRP3/IL-1β通路在视网膜慢性光损伤中的作用研究

发布时间：2021-11-06 20:52

　　背景与目的:老年性黄斑变性（Age-related macular degeneration,AMD）是西方国家老年人不可逆的视力损伤、甚至致盲的重要眼底疾病[1]。近年来,随着我国经济的发展、人民生活水平的不断提高,以及人口老龄化的加剧,AMD已逐渐成为导致我国老年人群严重视力损伤的首要原因,直接影响老年人的身心健康和生活质量。根据眼底萎缩性改变或脉络膜新生血管（choroidal neovascularization,CNV）形成等不同的临床特征,AMD目前主要分为干性AMD和湿性AMD两大类。晚期干性AMD患者广泛的视网膜色素上皮和光感受器损伤以及湿性AMD患者新生血管引起的渗出、出血及瘢痕都会造成患者严重的视力损害。因此,深入研究AMD发生和发展机制,探索新的预防和治疗途径,已成为当前我国及世界眼科发展所面临的重大问题以及研究热点。目前AMD的发病机制尚未明确,一般认为遗传因素和环境因素的综合作用启动了该病的发生,衰老和氧化应激引起了早期病变,炎症引导视网膜由生理性老化向不可逆的病理性损伤转变,这些因素互相协同、影响,交叉作用,共同参与AMD的病理过程。近年来多项研究提示视网膜... 

【文章来源】：南京医科大学江苏省

【文章页数】：108 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
前言
    一、AMD的流行病学概述
    二、AMD的分型与治疗进展
    三、多种因素参与AMD的病理过程
    四、光损伤是AMD的重要环境致病因素
    五、小胶质细胞在AMD慢性光损伤中的作用尚未定论
    六、炎性小体在视网膜免疫损伤中的作用渐受重视
第一部分 慢性低能量蓝光诱导C57BL/6小鼠视网膜光损伤的实验研究
    一、实验材料
        1.实验材料、试剂
        2.主要仪器
        3.实验动物
        4.主要光照设备搭建配置
    二、实验方法
        1.实验分组
        2.实验动物的准备
        3.动物麻醉
        4.视网膜闪光视网膜电图记录(Flashelectroretinogram,F-ERG)
        5.小鼠眼球取材
        6.石蜡切片制备
        7.冰冻切片制备
        8.HE染色和视网膜厚度测量
        9.IBA-1免疫荧光染色
        10.统计学分析
    三、实验结果
        1.蓝光照射C57BL/6小鼠3月后F-ERG波幅下降
        2.蓝光照射C57BL/6小鼠3月后视网膜外核层厚度变薄
        3.蓝光照射C57BL/6小鼠1月、3月后视网膜内小胶质细胞的活化
第二部分 CCR2基因敲除对慢性低能量蓝光诱导的小鼠视网膜光损伤的保护作用..
    一、实验材料
        1.实验材料、试剂
        2.主要仪器
        3.实验动物
        4.主要光照设备搭建配置
    二、实验方法
        1.实验分组
        2.实验动物的准备
        3.动物麻醉
        4.PCR基因鉴定
        5.视网膜闪光视网膜电图记录(Flashelectroretinogram,F-ERG)
        6.小鼠眼球取材
        7.石蜡切片制备
        8.冰冻切片制备
        9.HE染色和视网膜厚度测量
        10.TUNE视网膜细胞凋亡检测
        11.IBA-1免疫荧光染色
        12.统计学分析
    三、实验结果
        1.CCR2基因敲除降低低能量蓝光照后小鼠视网膜内小胶质细胞的活化量
        2.CCR2基因敲除保护低能量蓝光照导致的小鼠视网膜功能损伤
        3.CCR2基因敲除保护低能量蓝光照导致的小鼠视网膜形态损伤
        4.CCR2基因敲除保护低能量蓝光照导致的小鼠视网膜细胞凋亡
第三部分 小胶质细胞通过NLRP3途径介导小鼠视网膜光损伤的机制研究
    一、实验材料
        1.实验材料、试剂
        2.主要仪器
        3.实验动物
        4.主要光照设备搭建配置
    二、实验方法
        1.实验分组
        2.实验动物的准备
        3.动物麻醉
        4.小鼠眼球取材
        5.冰冻切片制备
        6.IBA-1、NLRP3、IL-1β免疫荧光染色
        7.Westernblot
        8.统计学分析
    三、实验结果
        1.CCR2基因敲除降少视网膜内IBA-1、NLRP3的共染
        2.CCR2基因敲除降少视网膜内NLRP3、IL-1β的表达
        3.CCR2基因敲除降低视网膜内NLRP3相关炎症因子的表达
讨论
参考文献
文献综述
    REFERENCES
附录
攻读学位期间取得学术成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Inhibitory effect of CCR3 signal on alkali-induced corneal neovascularization[J]. Wen-Juan Zhou 1,Gao-Qin Liu 1,2,Long-Biao Li 1,Xue-Guang Zhang 2,Pei-Rong Lu 1,2 1 Department of Ophthalmology,the First Affiliated Hospital of Soochow University,Suzhou 215006,Jiangsu Province,China 2 Jiangsu Institute of Clinic Immunology,the First Affiliated Hospital of Soochow University,Suzhou 215006,Jiangsu Province,China.  International Journal of Ophthalmology（English Edition）. 2012(03)



本文编号：3480506