腺病毒介导的mda-7/IL-24基因对人喉癌细胞Hep-2的凋亡作用

发布时间：2021-12-10 16:44

　　[目的]1.构建重组腺病毒搭载的基因]mda-7（melanoma differentiation-associated gene-7,黑色素瘤分化相关基因-7）／IL-24（Interleukin-24,白介素24）。2.使用构建好的载体系统Ad-mda-7/IL-24感染人喉癌Hep-2细胞系后通过定性、定量方法观察对喉癌细胞生长的影响。[方法]1.鉴定pPEP4质粒上的mda-7/IL-24, KpnI和XhoI限制性核酸内切酶消化腺病毒穿梭质粒载体pAdtrackCMV（含绿色荧光蛋白GFP）,连接后转化感受态E.coli DH5a,卡那霉素筛选克隆,抽提质粒,酶切、PCR鉴定；PmeI单酶切线性化搭载mda-7/IL-24基因的穿梭质粒pAdTrackCMV-mda7,与腺病毒骨架质粒AdEasy-1一起电转化至重组专用感受态细胞BJ5183,两质粒同源重组,卡那霉素+链霉素双抗筛选克隆,质粒抽提、电泳,PacI单酶切鉴定重组克隆,将阳性克隆质粒再转化入E.coli DH5a感受态,卡那霉素筛选克隆,再次抽提质粒,电泳、酶切、PCR鉴定获得pAd-mda7和pAd-GFP;限... 

【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

mda一7/IL一24在超生理水平下作用肿瘤细胞时相关信号通路，摘自[l5]

pAdTrackCMV质粒图谱

pAdTrackCMV质粒图谱图3，AdEasy一1质粒图谱均购自于美国stratagene公司，包括:(l)穿梭质粒pAdTraekCMV抗卡那霉素(KAN)，标记有绿色荧光蛋白，具有目的基因嵌入区域以及骨架质粒AdEasyl的同源重组位点(2)腺病毒骨架质粒AdEasyl氨节青霉素(AMP)抗性，与骨架质粒pAdTrackCMv的同源重组位点(3)重组优化大肠杆菌 BJS183抗链霉素(STREP)，同源重组效率高的一种大肠杆菌，提高两种质粒同源重组的平台。


本文编号：3533007