长链非编码RNAPCAT7在鼻咽癌细胞中的功能及作用机制研究

发布时间：2022-01-06 17:03

　　目的:鼻咽癌是世界范围内尤其是我国潮汕地区最为常见的头颈部肿瘤之一,起病隐匿而致大多数患者发现较晚,预后较为凶险。目前对鼻咽癌的治疗以放疗为主化疗为辅,尽管治疗手段的飞速发展,可对于患者5年生存率并没有显著提高。更为甚者鼻咽癌的发病机制仍不甚明了。近年来众多研究显示长链非编码RNA（Longnon-coding RNA,lncRNA）对于生命活动的调节功能具有及其重要意义,因此本研究拟主要研究lncRNAPCAT7与鼻咽癌之间的关系。探讨PCAT7在鼻咽癌中的表达变化,明确PCAT7对鼻咽癌细胞生物学活性的影响,并探讨其在鼻咽癌发生发展中所涉及的潜在分子机制。方法:第一部分:本研究选取50例鼻咽癌患者的手术取得的肿瘤组织作为实验组,并以其肿瘤组织邻近的正常组织（经病理检查确认）作为对照组,通过实时定量PCR（qRT-PCR）检测鼻咽癌组织中lncRNAPCAT7的表达。随后,本研究通过6种鼻咽癌细胞系和1种正常鼻咽上皮细胞系在细胞水平进一步展开研究:培养鼻咽癌细胞系 CNE-2,HNE-1,C666-1,NONE-1,SUNE-1,CNE-1 作为癌性细胞实验组,人鼻咽上皮细胞NP-6... 

【文章来源】：武汉大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１．２?ＰＣＡＴ７在鼻咽癌细胞系中表达上调

ｑＲＴ－ＰＣＲ?实验检测?６?组鼻咽癌细胞系（ＣＮＥ－２，?ＨＮＥ－１，Ｃ６６６－１，ＨＯＮＥ－１，??ＳＵＮＥ－１，?ＣＮＥ－１）和１组对照组上皮细胞系（ＮＰ－６９）中ＰＣＡＴ７的表达水平。??结果如图１．２所示，ＰＣＡＴ７在所有鼻咽癌细胞系中的表达均比在ＮＰ－６９中显著增??高。ＰＣＡＴ７在ＣＮＥ－１中的水平增加了?７．３７倍，而在ＳＵＮＥ－１中的表达水平更高，??增加了?８．３６?倍，在?ＣＮＥ－２，ＨＮＥ－１，Ｃ６６６－１，?ＨＯＮＥ－１?细胞中分别增加了?３．５４、??４．７７、５．５２、３．６７倍，因此，本研宄选择ＣＮＥ－１和ＳＵＮＥ－１这两种细胞进行后续??实验的研究。??１。１?＊??丨Ｌｉｉｉｉｌｌ??ＮＰ－６９?ＣＮＥ－２?ＨＮＥ－Ｉ?Ｃ６６６－Ｉ?ＨＯＭＥ－１?ＣＮＥ－１?ＳＵＮＥ－１??图１．２?ＰＣＡＴ７在鼻咽癌细胞系中表达上调。ｑＲＴ－ＰＣＲ实验检测了?６株鼻咽癌细胞系和１株对??１７??

?－ＧＡＡＣＡＴＧＣＡＧＴＣＴＡＧＧＡＡＣＣＧＧＣＡ－３，的ｓｉＲＮＡ－１具有最为显著的基因沉默??效应，可使目的基因的表达减少约７５％（图１．４），能够满足实验需求，因此ｓｉＲＮＡ－１??被用作后续实验的研宄。??１．２ｔ??Ｚ??？２?１０－??Ｓ?＊??Ｃ．?０．８－?★?Ｔ??￥?ｉＴ?＊?Ｔ?丄??￥?Ｉ?。６－?Ｔ?丄?＊??＾ｂ?丄?＊工??ＣＪ?０．４－?丄??｜?＊?工??ｇ?。２－霸?Ｉ??０．０－Ｉ??—???ｓ＾Ｘ?ＳＷＶ?ｓｖｒ、??￣ＣＮＥ－１?ＳＩＮＥ－１??图１．４转染各组ｓｉＲＮＡ后ＣＮＥ－Ｉ和ＳＵＮＥ－ｌ细胞的ｌｎｃＲＮＡＰＣＡＴ７的相对表达量??Ｆｉｇｕｒｅ?１．４?Ｒｅｌａｔｉｖｅ?ＰＣＡＴ７?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ａｆｔｅｒ?ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ?ｗｉｔｈ?ｃｏｎｔｒｏｌ．?ｓｈ－ＰＣＡＴ７＃ｌ．?ｓｈ－ＰＣＡＴ７＃２．??ｏｒ?ｓｈ－ＰＣＡＴ７＃３?ｉｎ?ＣＮＥ－１?ａｎｄ?ＳＵＮＥ－ｌｃｅｌｌ?ｌｉｎｅｓ．?＊Ｐ?＜?０．０５．?Ｍｅａｎｓ?士?ＳＥＭ?ａｒｅ?ｓｈｏｗｎ．?Ａｓｓａｙｓ??ｗｅｒｅ?ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ?ｉｎ?ｔｒｉｐｌｉｃａｔｅ．?Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｗａｓ?ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ?ｕｓｉｎｇ?ｓｔｕｄｅｎｔ?Ｗｅｓｔ．??１．３．６?ＩｎｃＲＮＡ?ＰＣＡＴ７－ｓｉＲＮＡ干扰作用可抑制鼻咽癌细胞增殖和克隆形成??本实验采用ＣＣＫ－８法检测鼻咽癌细胞系ＣＮＥ－１和ＳＵＮＥ－１在转染ｓｉＲＮ后??细胞增殖的改变。我们把实验分为ｓｈ－ＰＣＡＴ７组合ｓｈ－ＮＣ组

【参考文献】：
期刊论文
[1]miR-149促进鼻咽癌细胞侵袭和上皮-间质转变（英文）[J]. 罗朝辉,张李洋,李征,江琛,代亚飞,刘晓萍,郑瑛,俞海波,向娟娟,李桂源.  中南大学学报(医学版). 2011(07)
[2]Ⅲ、Ⅳ a期鼻咽癌患者放疗同期化疗加辅助化疗的疗效[J]. 胡巧英,刘鹏,王磊,付真富.  癌症. 2007(04)



本文编号：3572838