一氧化碳释放分子-3预处理对于调控过氧化氢诱导的兔源性晶状体上皮细胞凋亡的研究

发布时间：2022-01-16 16:05

　　目的:老年性白内障是全世界首位的可逆性致盲性眼病,其发病与晶状体上皮细胞（LECs）内活性氧簇（ROS）过量积聚及线粒体功能紊乱导致的细胞凋亡密切相关。目前认为过氧化氢（H2O2）是引起老年性白内障的最主要的氧化应激物质。近年的研究发现,一氧化碳（CO）分子作为体内血红素加氧酶（HO）的代谢产物之一,可以通过抗氧化、抗炎症、抗凋亡等分子机制对多种疾病起到治疗效果,具有潜在的临床应用价值。目前关于CO对晶状体上皮细胞是否具有保护作用未见报道。因此,为了进一步研究HO-1保护LECs的具体作用机制,初步探索CO预处理对LECs的保护效果,及CO与线粒体应激在H2O2诱导LECs损伤模型中相关性,本研究采用不同浓度的一氧化碳释放分子-3（CORM-3）作为CO释放的载体,并建立兔源性LECs的氧化应激损伤模型,同时优化H202及CORM-3的最佳浓度与作用时间,进一步探讨CORM-3预处理对于H2O2诱导的兔LECs损伤的保护效果及作用机制。方法:取新西兰兔前囊膜与赤道部囊膜,于体外分离、鉴定、培养原代LECs。CCK-8法确定H2O2、CORM-3及iCORM-3的最佳实验浓度及作用时间。... 

【文章来源】：中国人民解放军医学院北京市

【文章页数】：110 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．免疫荧光法鉴定体外分离、传代的兔原代晶状体上皮细胞（Ｘ４０）将??４Ｘ?１０３个细胞／孔浓度的兔ＬＥＣｓ接种于１２孔板内

图２．?ＣＣＫ－８法测定兔ＬＥＣｓ的存活率并确定Ｈ２０２的半数致死量（ＬＤ５。）浓度（Ａ）??相差显微镜观察兔ＬＥＣｓ在不同Ｈ２０２浓度梯度作用下的细胞形态变化（Ｘ１００）。（Ｂ）??ＣＣＫ－８试剂与不同处理组共同孵育３ｈ，并使其终浓度达到１０％，应用酶标仪测定溶液??光密度，并以Ｍｅａｎ土ＳＤ?（平均数土标准差）表示，所有实验均独立重复３次。??３．２?Ｃ０ＲＭ－３实验最佳浓度及作用时间的确定??首先通过氧合肌红蛋白间接测定Ｃ０ＲＭ－３与ｉＣＯＲＭ－３的Ｃ０释放情况（图３）。在??３７°Ｃ，ＰＨ＝７．?３７±０．?０８?的条件下，不同浓度的?Ｃ０ＲＭ－３?（２５?ｕ?Ｍ，５０?ＵＭ，１００?ＰＭ，?２００?ｕＭ）??在６０ｍｉｎ内均以线性模式释放⑶，Ｃ０释放量与释放速度与溶液Ｃ０ＲＭ－３浓度线性相关。??１９??

并以Ｍｅａｎ土ＳＤ?（平均数土标准差）表示，所有实验均独立重复３次。??３．２?Ｃ０ＲＭ－３实验最佳浓度及作用时间的确定??首先通过氧合肌红蛋白间接测定Ｃ０ＲＭ－３与ｉＣＯＲＭ－３的Ｃ０释放情况（图３）。在??３７°Ｃ，ＰＨ＝７．?３７±０．?０８?的条件下，不同浓度的?Ｃ０ＲＭ－３?（２５?ｕ?Ｍ，５０?ＵＭ，１００?ＰＭ，?２００?ｕＭ）??在６０ｍｉｎ内均以线性模式释放⑶，Ｃ０释放量与释放速度与溶液Ｃ０ＲＭ－３浓度线性相关。??１９??


本文编号：3592997