A2E影响端粒功能加速RPE衰老在AMD发病中的作用及相关机制研究

发布时间：2022-02-09 18:30

　　背景及目的:年龄相关性黄斑变性（age-related macular degeneration,AMD）又称老年性黄斑变性,常伴有不可逆的视功能严重损害,是西方发达国家首位致盲性眼病,随着我国人口老龄化日趋严重,其患病率也日益增加。然而,AMD发病机制尚不十分明确,因此,研究AMD的发病机制迫在眉睫。RPE细胞对于维持正常视功能及眼底微环境有着重要作用。研究发现,RPE细胞功能障碍与AMD发病有关。随着年龄增长,RPE细胞脂褐素不断沉积,研究已证明,其主要成分A2E可导致DNA损伤。端粒位于染色体末端,与衰老密切相关,为DNA脆性位点,由此,我们推测,A2E可导致端粒DNA损伤,加速RPE细胞衰老,改变RPE细胞分泌表型,从而影响眼底微环境,为AMD的发病机制之一。因此,本课题主要探索A2E加速RPE细胞衰老及其相关机制在AMD发病中的作用,为寻找新的治疗靶点奠定理论依据。方法:本课题使用ARPE19细胞株。第一步,A2E孵育RPE细胞,经蓝光照射建立光损伤模型;通过MTT实验观察不同浓度A2E对于RPE细胞生长的影响,从而选择合适的干预浓度。进一步,通过Westernblot检测D... 

【文章来源】：上海交通大学上海市211工程院校985工程院校教育部直属院校

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

AMD的病理分期[6]

图 2. 衰老过程中眼底病理改变示意图[22]Fig.2 RPE cells in 3-year old child and 80-year old person.[22]目前已经证实，过多无功能的 RPE 细胞累积导致衰老及疾病的发生[23]。临床及体外研究发现，老年人 RPE 细胞的复制能力及对损伤应答能力在衰老过程中不断减退[24, 25]，吞噬功能不断下降，导致过度代谢产物堆积，尤其是脂褐

上海交通大学博士学位论文与磷脂酰乙醇胺（phosphatidylethanolamine, PE）发生Schiff-base反应形成A2PE，最终通过磷酸水解形成 A2E。RPE 细胞中，A2E 具有光氧化损伤作用，对于430-460nm 波段（即蓝光波段）光照十分敏感，可产生单线态氧、超氧化物，或通过环氧化产生环氧化物等活性氧簇（ROS），进而对细胞产生氧化损伤。此外，高浓度 A2E 导致细胞膜溶解，直接破坏 RPE 细胞[29]；A2E 可以降低线粒体膜电位，限制 RPE 细胞的氧化磷酸化，影响 ATP 生成，降低吞噬功能[30]；A2E通过提高溶酶体内 PH 来抑制溶酶体降解功能[31]；A2E 影响胆固醇的流出，并且抑制了酸性脂肪酶，影响 RPE 细胞中胆固醇循环[32]。重要地是，有研究证实，蓝光诱导下 A2E 可以攻击 DNA，使 G 氧化为 8-oxo-dG，造成 DNA 损伤[33]。另一方面，A2E 可以通过自身环氧化形成 A2E 环氧化物，使得碱基氧化，造成DNA 损伤，并且，抗氧化剂可以缓解这一现象[34]。


本文编号：3617464