MicroRNA24对碘酸钠造成的视网膜损伤的保护作用的实验研究

发布时间：2017-05-19 21:32

  本文关键词：MicroRNA24对碘酸钠造成的视网膜损伤的保护作用的实验研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景：视网膜疾病是一类严重影响人类视力及生活质量的疾病。视网膜的损伤尤其是视网膜上皮层的损伤，至今临床上尚无发现可靠有效的治疗方法。随着医学发展，采用药物、手术、激光等虽可控制病情，但无法从根本上治疗基因缺陷。而基因治疗越来越受到关注。随着对microRNAs家族研究的深入，microRNA24的基因功能引起研究热潮。目前国内就microRNA24对眼科疾病尤其是视网膜损伤的作用机制的研究尚不多见。 目的：将包装好的慢病毒载体分别用于细胞实验和动物实验，分别检测在体外和体内碘酸钠刺激的情况下，microRNA24的表达对碘酸钠造成的ARPE-19的损伤是否具有保护作用。 方法：（1）根据目的基因构建慢病毒载体，然后进行慢病毒包装、收获及浓缩，并且进行滴度的测定。（2）细胞实验：分别用0.3mg/ml,0.6mg/ml,1.2mg/ml,2.4mg/ml,4.8mg/ml,9.6mg/ml浓度的碘酸钠刺激视网膜上的不同细胞（ARPE-19,Muller,RGC-5），比较视网膜上各种细胞对碘酸钠的敏感性，为动物模型的建立提供依据。分别加入5μl，10μl，15μl的包装好的病毒，让其感染ARPE-19细胞，比较不同剂量感染后的ARPE-19细胞与单纯ARPE-19对碘酸钠刺激的敏感性是否有改变。（3）动物实验：取160g左右的SD大鼠20只，分为2组，裂隙灯及眼底镜检查排除角膜疾病，白内障及眼底疾病，ERG检查排除左右眼a波及b波振幅有差异者。第一组先按50mg/kg的剂量尾静脉注射碘酸钠溶液，2天后进行视网膜下腔病毒注射，统一规定右眼注射病毒5μl，左眼注射同等体积的灭菌的PBS溶液。第二组预先1周注射病毒，按照第一组的注射标准与方式，1周后再进行尾静脉注射碘酸钠溶液。两组分别于注射完成后1周，2周，4周，6周进行ERG检查，统计a波及b波振幅，看有无统计学差异。 结果：（1）成功构建了慢病毒载体，并且测试病毒滴度为2E+7TU/μl。（2）细胞实验：经不同浓度碘酸钠作用48h后，三种细胞（ARPE-19,Muller,RGC-5）IC50分别为（2.26±0.12）、(2.34±0.76)、(2.13±0.69)mg/ml。说明三种细胞对碘酸钠的敏感性依次为RGC-5ARPEMuller。对于每种细胞，随着碘酸钠浓度的升高，其存活率降低。分别收集24h,48h,72h病毒感染的ARPE-19细胞，不同剂量病毒感染后的细胞(ARPE-19+5μl，ARPE-19+10μl，ARPE+15μl)的IC50分别为（2.49±0.32）、（3.62±0.42）、（4.83±0.51）mg/ml。说明不同剂量病毒感染后ARPE-19的50%碘酸钠抑制度浓度均较单纯ARPE-19细胞明显升高（P0.05，=0.05），而（ARPE+15μl）组相对单纯ARPE-19组升高更显著（P0.05，=0.05）。即在相同浓度的碘酸钠刺激下，（ARPE+15μl）组细胞存活率最高。这初步说明microRNA24对ARPE-19细胞是有保护作用的。而且这种保护作用在高剂量病毒组效果更显著。（3）动物实验：两组在1w，2w，4w周后做ERG检查，五个强度下左右两眼a波及b波均无振幅，对比无统计学差异（P0.05）。在第6周做ERG检查，五个强度下两组均a波及b波均有振幅，但比较两组在五个强度下的a波及b波振幅并无统计学差异（P0.05）。 结论：大鼠尾静脉注射碘酸钠可选择性破坏视网膜色素上皮细胞，成功建立视网膜损伤的动物模型；病毒感染的ARPE-19细胞对碘酸钠刺激有抵抗作用，细胞存活率增高，说明microRNA24对碘酸钠造成的视网膜损伤有保护作用，并且与病毒剂量成正相关；视网膜下腔注射病毒后第六周ERG检查a波及b波振幅同样验证了microRNA24对视网膜损伤的保护作用，但是否有预先保护作用在本实验中尚未验证。
【关键词】：microRNA24 碘酸钠 ARPE-19
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R774.1
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-11
• 第一部分 慢病毒包装和滴度检测11-19
• 1 材料11-13
• 2 方法13-15
• 3 结果15-17
• 4 讨论17-19
• 第二部分 体外实验研究19-34
• 1 材料19-21
• 2 方法21-24
• 3 结果24-32
• 4 讨论32-34
• 第三部分 体内实验研究34-40
• 1 材料34-35
• 2 方法35-37
• 3 结果37-38
• 4 讨论38-40
• 结论40-41
• 参考文献41-44
• 综述：MICRORNA24 功能的研究新进展44-54
• 参考文献49-54
• 中英文对照缩略词表54-55
• 攻读学位期间科研成绩55-56
• 致谢56-57

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 王莹;宋响文;;miRNAs在不同物种进化中序列保守性的研究[J];辽宁师范大学学报(自然科学版);2009年03期

2 王莹;龙亮华;;豌豆中抗寒相关性miRNAs功能特异性验证及其克隆的研究[J];辽宁师范大学学报(自然科学版);2010年02期

  本文关键词：MicroRNA24对碘酸钠造成的视网膜损伤的保护作用的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：379938