胚胎干细胞移植治疗视网膜色素变性的相关研究

发布时间：2017-05-31 03:11

  本文关键词：胚胎干细胞移植治疗视网膜色素变性的相关研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的： 视网膜色素变性（Retinitis pigmentosa，RP）是一种遗传性进行性光感受器细胞丧失并最终导致视网膜变性萎缩为特征的一组疾病，目前RP还缺乏有效的治疗方法。本研究旨在通过腹腔注射碘酸钠（NaIO_3）造成RP小鼠模型，以探讨胚胎干细胞移植术对RP小鼠的治疗作用。 材料与方法： 健康C57BL/6小鼠60只，随机取出40只小鼠腹腔注射NaIO_3致小鼠双眼RP模型，其余20只小鼠腔腹注入等量生理盐水。建模后第7天，将所有RP模型小鼠的左眼于视网膜下腔注射绿色荧光小鼠胚胎干细胞（Green fluorescentmouse embryonic stem cells，GFP-mESCs），此组简称为GFP-mESCs治疗组；右眼于视网膜下腔注射等量DMEM/F12，此组称为RP模型组；腹腔注入等量生理盐水的小鼠视网膜下腔注射等量DMEM/F12，此组称为正常对照组。第4周末处死所有小鼠，取小鼠眼球分别行HE染色检测视网膜全层厚度和感光细胞层厚度，免疫组化染色及蛋白质印迹法检测S-Opsin及β-Tubulin蛋白表达量。 结果： 1、用碘酸钠腹腔注射法成功地建立了C57BL/6小鼠双眼RP动物模型。 2、从视网膜组织形态学方面看，GFP-mESCs治疗后视网膜结构仍出现视网膜损伤表现，但损伤程度较未经治疗的RP模型组轻。 3、从视网膜相关蛋白表达量看，GFP-mESCs治疗后S-Opsin及β-Tubulin蛋白表达量较正常对照组减少，却高于RP模型组。 结论： 从视网膜组织从视网膜组织形态学及视网膜相关蛋白表达量的变化方面，可以证实视网膜下腔胚胎干细胞移植治疗可以在一定程度上缓解RP的发生发展，为临床治疗RP提供帮助
【关键词】：RP GFP-mESCs 移植治疗 NaIO_3
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R774.1
【目录】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-9
• 第1章 前言9-12
• 1.1 概述9
• 1.2 国内外的研究现状与存在的问题9-12
• 1.2.1 视网膜色素变性的研究现状9-10
• 1.2.2 本研究提出的假说和验证方法10-12
• 第2章 材料与方法12-23
• 2.1 实验动物、材料和设备12-14
• 2.1.1 实验动物12
• 2.1.2 实验试剂12-13
• 2.1.3 实验设备13-14
• 2.2 实验方法14-22
• 2.2.1 造模、实验分组和实验取材14-15
• 2.2.2 GFP-mESCs 的移植15-16
• 2.2.3 苏木素-伊红（HE）染色及免疫组织化学（IHC）染色16-18
• 2.2.4 蛋白质印迹法试验18-22
• 2.3 统计学处理22-23
• 第3章 结果23-34
• 3.1 小鼠成活率23-24
• 3.2 视网膜组织形态学观察24-26
• 3.2.1 HE 染色结果判定24-25
• 3.2.2 免疫组化染色结果判定25-26
• 3.3 视网膜的体视学分析26-30
• 3.3.1 各组视网膜厚度检测26-28
• 3.3.2 各组的免疫组化分析28-30
• 3.4 蛋白质印迹法检测蛋白30-34
• 3.4.1 S-Opsin 的蛋白相对表达量（%）30-31
• 3.4.2 β-Tubulin 的蛋白相对表达量（%）31-34
• 第4章 讨论34-39
• 4.1 RP 的发病机制与目前的治疗方案34
• 4.2 关于 NaIO_3建立 C57bl/6 小鼠双眼 RP 模型与胚胎干细胞的运用34-35
• 4.3 视网膜下腔注射 GFP-mESCs 的可行性因素35-37
• 4.3.1 视网膜的特殊结构利于移植细胞的存活35-36
• 4.3.2 视网膜的损伤利于移植细胞的迁移分化36
• 4.3.3 经玻璃体-视网膜途径的内路法移植细胞是安全可靠的36-37
• 4.4 GFP-mESCs 视网膜下腔移植术后 C57bl/6 小鼠视网膜组织的保护作用2937-39
• 4.4.1 GFP-mESCs 移植术后视网膜形态学研究37
• 4.4.2 GFP-mESCs 移植术后视网膜相关蛋白表达量研究37-39
• 第5章 结论与展望39-40
• 5.1 结论39
• 5.2 展望39-40
• 致谢40-41
• 参考文献41-44
• 攻读学位期间的研究成果44-45
• 综述45-54
• 参考文献51-54

【参考文献】

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本文编号：408521