慢病毒载体介导TLR2基因干扰大鼠角膜上皮细胞和基质细胞的实验研究

发布时间：2017-07-08 09:19

  本文关键词：慢病毒载体介导TLR2基因干扰大鼠角膜上皮细胞和基质细胞的实验研究

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【摘要】：目的观察慢病毒载体(lentiviral vector,LV)介导TLR2基因干扰大鼠角膜上皮细胞(corneal epithelial cell,CEC)和基质细胞(corneal stromal cell,CSC)的有效性和安全性。方法分别培养大鼠CEC和CSC,转染组用携带绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)和TLR2小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)的LV转染,空白对照组加入空白培养液,阴性对照组加入不携带目的基因的LV。转染组按最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)分别为10、50、100、200加入LV-TLR2-siRNA-eGFP,选择eGFP表达最强的MOI进行后续实验,观察细胞形态,CCK8检测细胞增殖情况。流式细胞仪检测两种角膜细胞的转染效率,RT-PCR检测转染后TLR2 mRNA的表达情况。结果 MOI=200时转染CEC和CSC荧光表达最高,和空白对照组相比细胞形态未发生明显改变;CCK8结果显示转染组与空白对照组、阴性对照组的IOD值差异均无统计学意义(均为P0.05);流式细胞仪检测CEC和CSC转染效率分别为77.600% ±1.100%和76.300% ±1.387%,和阴性对照组相比差异均有显著统计学意义(均为P0.001)。RT-PCR检测转染后CEC和CSC TLR2 mRNA相对表达量均较对照组明显下降,差异均有显著统计学意义(均为P0.001)。结论 LV-TLR2-siRNA-eGFP可在体外稳定有效转染CEC和CSC,且对细胞安全性无影响,可有效下调TLR2 mRNA的表达。
【作者单位】： 南方医科大学南方医院眼科;
【关键词】： 慢病毒载体 基因转染 角膜细胞 TLR
【基金】：国家自然科学基金资助(编号:81170887) 南方医科大学南方医院横向课题匹配基金资助(编号:G201202)~~
【分类号】：R772.2
【正文快照】： 角膜移植是机体内成功率最高的移植手术之一。穿透性角膜移植术中角膜上皮细胞(corneal ep-ithelial cell,CEC)和角膜基质细胞(corneal stromal cell,CSC)的稳态对实现术后正常的视功能、维持眼表完整性起到重要作用。已有研究显示,TLR2可通过特异性识别内源性及外源性配体,

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本文编号：533909