氯通道阻断剂对bFGF诱导下的晶状体上皮细胞增殖和迁移的影响

发布时间：2017-07-27 04:00

  本文关键词：氯通道阻断剂对bFGF诱导下的晶状体上皮细胞增殖和迁移的影响

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【摘要】：目的: 观察氯通道阻断剂NPPB和DIDS对碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）诱导的晶状体上皮细胞HLE-B3增殖及迁移的影响。 方法: 取对数生长期的晶状体上皮细胞（HLE B-3）为研究对象，用10μg/L bFGF作用的细胞作为bFGF对照组；常规培养的晶状体上皮细胞作为空白对照组；实验组即不同浓度氯通道阻断剂NPPB（50、100、150μmol/L）及DIDS（10、50、100μmol/L）分别加入含10μg/L bFGF的HLE B-3细胞的培养液中共同作用24h、48h及72h。采用CCK-8法、免疫细胞化学法及PI单染流式细胞术分别检测晶状体上皮细胞增殖率、细胞增殖核抗原KI-67蛋白的表达率及细胞周期的变化，进而观察氯通道阻断剂对碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）诱导的晶状体上皮细胞HLE-B3增殖的影响。 同样取对数生长期的晶状体上皮细胞（HLE B-3）为研究对象，用10μg/L bFGF作用的细胞作为bFGF对照组；常规培养的晶状体上皮细胞作为空白对照组；实验组即用150μmol/L NPPB和100μmol/L DIDS，并通过划痕实验及Transwell实验检测NPPB/DIDS对bFGF诱导的细胞迁移的影响。 结果: 1. CCK-8检测表明加入10μg/L bFGF对HLE B-3细胞有明显的促增殖的作用。在bFGF作用下，，氯通道阻断剂NPPB和DIDS对晶状体上皮细增殖的抑制表现为出剂量及时间依赖性（bFGF+NPPB组：F时间=305.282，F浓度=18.76，P=0.000；bFGF+DIDS组：F时间=94.436，F浓度=24.415，P=0.000）。 2.不同浓度的氯通道阻断剂作用于bFGF诱导的晶状体上皮细胞48h后，细胞内Ki-67蛋白表达细胞数有不同程度下降，差异存在统计学意义（bFGF+NPPB组：F=580.3，P=0.000；bFGF+DIDS组：F=507.4,P=0.000），且呈浓度依赖性抑制Ki-67表达。其中150μmol/L NPPB组和100μmol/L DIDS组Ki-67的阳性细胞率分别下降至（18.32±1.23）%和（11.21±1.02）%，与bFGF处理组相比较，差异均有统计学意义（P0.01，P0.01）。 3. PI染色流式细胞周期检测结果示与空白对照组和bFGF组相比，150μmol/LNPPB组和100μmol/L DIDS组细胞增殖能力下降，G0/G1期细胞比例升高（(F=390.754，P=0.000），S期比例减少（F=166.240，P=0.000）。 4. Transwell实验结果表明，150μmol/L NPPB及100μmol/L DIDS作用24-48h细胞迁移数较10μg/L bFGF处理组少，具有较明显的抑制作用（F=56.039，578.746，P0.001）。且150μmol/L NPPB及100μmol/L DIDS作用24h后，细胞迁移抑制率分别为35.44%、54.43%（F=56.039，P0.001）。划痕实验结果显示，氯通道阻断剂150μmol/L NPPB及100μmol/L DIDS作用24h后能到有效地抑制10μg/L bFGF诱导的细胞横向迁移，并呈时间依赖性。 结论: 10μg/L bFGF可以促进HLE-3细胞增殖移行，而150μmol/L NPPB及100μmol/LDIDS作用24h能够可以有效的抑制10μg/L bFGF诱导的LECs增殖及移行。即NPPB/DIDS作为氯通道阻断剂，在一定范围内能够抑制由bFGF诱导的人晶状体上皮细胞增殖及移行，且呈时间、浓度双重依赖性。
【关键词】：细胞增殖 细胞迁移 氯通道 碱性成纤维细胞生长因子 晶状体上皮细胞
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R779.66
【目录】：

• 英文缩略语4-5
• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 前言10-12
• 材料与方法12-21
• 材料12-14
• 方法14-21
• 结果与分析21-28
• 讨论28-32
• 结论32-33
• 参考文献33-36
• 综述36-46
• 参考文献43-46
• 致谢46

【参考文献】

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本文编号：579642