hBD-2体外抗菌免疫防御功能的研究

发布时间：2017-08-19 19:06

  本文关键词：hBD-2体外抗菌免疫防御功能的研究

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【摘要】：目的：构建人鼻黏膜上皮细胞原代体外培养模型,评估hBD-2基因转染人鼻黏膜原代上皮细胞培养产物蛋白质的体外抗菌活性,为进一步hBD-2在体内的免疫防御功能研究提供依据。 方法：1.收集人下鼻甲黏膜,酶消化结合组织块法体外培养人鼻黏膜上皮细胞,免疫组化鉴定结果；2.脂质体Lipofectamine2000介导重组pIRES2-Zsgreen1-hBD2质粒转染人鼻黏膜上皮细胞,荧光显微镜、荧光定量RT-PCR法检测人鼻黏膜上皮细胞hBD-2表达；3.收集细胞培养上清,用打孔法评价对鼻-鼻窦炎常见菌群的抗菌活性。 结果：1.经细胞角蛋白AE1/AE2免疫组化鉴定体外培养的人鼻黏膜原代细胞为上皮细胞,细胞阳性率达93.1%;2.荧光显微镜检测hBD-2转染后的细胞表现出绿色荧光,转染率约35%。荧光定量RT-PCR法检测人鼻黏膜上皮细胞hBD-2mRNA表达升高；3.转染hBD-2的细胞培养上清对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和肺炎链球菌均产生抑菌环。 结论：1.酶消化结合组织块法体外培养鼻黏膜上皮细胞,细胞分离率高,增殖速度快；2.脂质体介导重组pIRES2-Zsgreen1-hBD2质粒转染人鼻黏膜上皮细胞后能有效表达hBD-2；3.转染表达hBD-2基因的人鼻黏膜上皮细胞能产生有效的抗菌肽并在体外发挥抗菌免疫防御作用。图9幅,表1个,参考文献33篇。
【关键词】：鼻黏膜上皮细胞 质粒 转染 hBD-2 抗菌
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R765.41
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 目录7-8
• 符号说明8-9
• 1 前言9-12
• 2 材料与方法12-24
• 2.1 主要材料与设备12-15
• 2.2 人鼻黏膜上皮细胞原代培养及鉴定15-17
• 2.3 pIRES2-Zsgreen1-hBD2及pIRES2-Zsgreen1质粒的抽提、纯化17-19
• 2.4 hBD-2重组质粒在鼻黏膜上皮细胞中的转染表达19-20
• 2.5 转染细胞中表达产物的检测20-22
• 2.6 体外抑菌实验22-24
• 3 实验结果24-30
• 3.1 鼻黏膜上皮细胞形态特征24-25
• 3.2 免疫组化鉴定鼻黏膜上皮细胞结果25
• 3.3 保存质粒的转化25-26
• 3.4 脂质体介导pIRES2-Zsgreen1-hBD2转染鼻黏膜上皮细胞26-27
• 3.5 荧光定量RT-PCR检测hBD-2mRNA的表达27-28
• 3.6 细胞转染上清体外抑菌实验28-30
• 4 讨论30-34
• 4.1 鼻黏膜上皮细胞原代培养30-31
• 4.2 脂质体介导hBD-2基因转染鼻黏膜上皮细胞31-32
• 4.3 体外抑菌实验32-34
• 5 结论34-35
• 参考文献35-38
• 综述38-49
• 参考文献44-49
• 攻读学位期间主要的研究成果49-50
• 致谢50

【共引文献】

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1 程兰玲;荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞β-防御素mRNA的表达及可能信号通路的初步研究[D];内蒙古农业大学;2012年

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本文编号：702419