乙酰化EGCG的酶法制备及其在油脂中抗氧化应用研究

发布时间：2018-06-14 20:10

  本文选题：表没食子儿茶素没食子酸酯 + 乙酰化　； 参考：《江南大学》2013年硕士论文

【摘要】：表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是茶叶茶多酚中质量分数最大的一种成分，约占茶多酚总量的30%～40%。EGCG具有抗氧化、抗突变、防辐射、抗肿瘤、调节免疫和延缓衰老等生理活性作用。然而由于EGCG较高的水溶性和较低的脂溶性，大大限制了它作为天然抗氧化剂和医药、保健原料的潜在应用，，尤其是在精炼食用油脂中的应用。本文利用酶法制备乙酰化EGCG以期增加其脂溶性，并对乙酰化EGCG的反应条件、分离条件及乙酰化EGCG在食用油中的溶解性和抗氧化活性等进行了研究。主要研究内容包括： 确定了酶法制备乙酰化EGCG的最优反应条件：酶的种类为脂肪酶TLIM，反应溶剂体系为乙腈：异丙醇=5:5，反应温度为45℃，反应时间为11h，底物摩尔比（乙酸乙烯酯与EGCG物质的量之比）为0.4:1，脂肪酶添加量为5%(w/w,酶:底物)。在此条件下，EGCG的乙酰化转化率为96.73%。采用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)和红外光谱对EGCG乙酰化产物进行了确证。通过对EGCG反应前后红外图谱进行对照分析，发现反应后产物具有明显的羰基(C=O)吸收峰，说明乙酰化反应是成功的。LC-MS/MS进一步确认该产物是一种混合物，根据乙酰基取代数目的不同，分为一取代、二取代和三取代三类产物，每类取代产物由于取代位置的不同，又分为不同的单体。 利用高速逆流色谱法（HSCCC）分离乙酰化EGCG粗产品，并确定了分离条件:溶剂系统为正己烷：乙酸乙酯：甲醇：水=1.5:5:1.5:5(v/v)，上相为固定相，下相为流动相，正向旋转，转速为700r/min。将HSCCC分离得到的4个峰进行HPLC检测，可知峰2为纯度达到93.52%的EGCG乙酰化一取代产物，经过质谱和核磁共振分析，确定该产物为5'-O-乙酰基EGCG。 通过溶解度和透光率实验表明，乙酰化EGCG在食用油中溶解性较好，透明度较高，在30℃时溶解度为0.50g/kg。色差实验表明在添加量为200mg/kg时，乙酰化EGCG对于大豆油色泽、亮度没有显著影响。 采用过氧化值（POV）法考察并比较了不同抗氧化剂在食用油中的抗氧化性能。结果表明，在添加量同为200mg/kg时，乙酰化EGCG在油脂中的抗氧化活性要高于未改性EGCG和BHT，略低于TBHQ。而对于不同取代度的乙酰化EGCG产物，其抗氧化活性顺序为：乙酰化一取代产物一取代和二取代的混合产物乙酰化EGCG混合物未改性EGCG。清除DPPH自由基能力比较结果为VCEGCG乙酰化EGCGTBHQ。
[Abstract]:Epigallocatechin gallate (EGCGG) is the largest component in tea polyphenols, accounting for 30% of the total tea polyphenols. EGCG has antioxidant, mutagenic, radiation-resistant, anti-tumor, Regulating immune and delaying senescence and other physiological activities. However, the potential applications of EGCG as natural antioxidants, medicine and health care raw materials, especially in refined edible oils, are greatly limited due to its high water solubility and low fat-solubility. In this paper, acetylated EGCG was prepared by enzymatic method in order to increase its liposolubility. The reaction conditions, separation conditions, solubility and antioxidant activity of acetylated EGCG in edible oil were studied. The main contents are as follows: the optimal reaction conditions for the preparation of acetylated EGCG by enzymatic method were determined: the enzyme was lipase TLIMA, the reaction solvent system was acetonitrile: isopropanol 5: 5, the reaction temperature was 45 鈩

本文编号：2018812