镉诱导HEK293细胞自噬和凋亡

发布时间：2018-08-30 17:23

【摘要】：目的探究镉(二氯化镉,Cd Cl2)能否诱导HEK293细胞自噬与凋亡以及细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2和AKT蛋白在自噬中的作用。方法将绿色荧光蛋白(GFP)-微管相关蛋白Ⅰ轻链3B(LC3B)重组质粒转染至HEK293细胞24 h后,以Cd Cl22,4,8和10μmol·L~(-1)诱导细胞12 h,荧光显微镜观察自噬情况;以Cd Cl22,4,8和10μmol·L~(-1)诱导未转染GFP-LC3B重组质粒的HEK293细胞12 h,透射电子显微镜下观察自噬泡;Western蛋白印迹检测LC3B-Ⅱ/Ⅰ的表达变化,以及ERK1/2和AKT蛋白的磷酸化表达;流式细胞仪检测Cd Cl2(≤10μmol·L~(-1))对HEK293细胞凋亡的影响。用3-MA(自噬抑制剂)预处理Cd Cl210μmol·L~(-1)诱导的HEK293细胞12 h,Western蛋白印迹检测细胞内激活型胱天蛋白酶3的表达。结果 Cd Cl2(≤10μmol·L~(-1))诱导HEK293细胞12 h,荧光显微镜下转染细胞出现绿色荧光点状聚集,电镜下观察到自噬泡,Western蛋白印迹检测到LC3B-Ⅱ/Ⅰ表达量增加(P0.05,P0.01),ERK1/2和AKT蛋白磷酸化水平均增加(P0.05,P0.01)。流式细胞仪检测出Cd Cl2(≤10μmol·L~(-1))诱导的HEK293细胞发生了细胞凋亡;加入3-MA20μmol·L~(-1)+Cd Cl210μmol·L~(-1)后,细胞自噬被抑制,激活型胱天蛋白酶3表达增加(P0.01)。结论低浓度Cd Cl2(≤10μmol·L~(-1))能引起细胞自噬,可能通过ERK1/2和AKT蛋白介导细胞自噬;自噬与凋亡相伴发生,自噬可能抑制凋亡。
[Abstract]:Objective to investigate whether cadmium chloride (CD Cl2) can induce autophagy and apoptosis of HEK293 cells and the role of extracellular regulated protein kinase (ERK) 1 / 2) and AKT protein in autophagy. Methods the recombinant plasmid of green fluorescent protein (GFP) microtubule-associated protein 鈪，

本文编号：2213744