有机杀虫剂双氢鱼藤酮对人浆细胞的促凋亡作用及其机理研究

发布时间：2019-11-07 02:06

【摘要】：研究背景和目的：双氢鱼藤酮（DHR）是天然杀虫剂鱼藤酮的代谢产物，与鱼藤酮一样广泛应用于农业生产，包括渔业、园艺和有机农产品等。DHR是一个有效的线粒体抑制剂并可能引起帕金森样综合症，然而DHR对其他系统的作用尚不清楚。因为浆细胞在免疫屏障系统中发挥重要作用，本课题拟研究DHR对人浆细胞的毒副作用，为DHR的安全性评价提供新的证据。 研究方法：用噻唑蓝（MTT）法检测DHR是否抑制浆细胞增殖，流式细胞技术检测DHR对浆细胞周期、凋亡和线粒体膜电位的影响。免疫印迹检测DHR对浆细胞的细胞周期蛋白、凋亡蛋白、内质网应激相关蛋白和p38有丝分裂原激活蛋白激酶表达的调控。 研究结果： （1）MTT试验表明了DHR能以浓度依耐性的方式抑制人浆细胞存活率，免疫印迹显示DHR下调参与G1期调控点的周期调节剂cyclin D3、CDK4/6、cyclinE和p-Rb的表达以及上调抑癌因子p53的表达，，且使浆细胞细胞周期滞止在G0/G1期。 （2）流式细胞技术表明DHR能引起浆细胞的凋亡，且免疫印迹证明caspase-3、8、9以及PARP均被剪切，抗凋亡蛋白Bcl-2和Mcl-1表达被下调，促凋亡蛋白Bim表达被上调。 （3）利用四甲基罗丹明甲酯（TMRM）染色，经流式细胞技术表明DHR能降低浆细胞的线粒体膜电位。 （4）用DHR处理浆细胞不同浓度或不同时间，内质网应激和未折叠蛋白反应的标志蛋白GRP78、 ATF4和CHOP均被上调。 （5）浆细胞经过不同浓度DHR处理后，有丝分裂原激活蛋白激酶p38磷酸化增加，而JNK磷酸化减少。当用p38抑制剂SB203580预处理浆细胞，由DHR引起的p38磷酸化水平和凋亡蛋白（caspase-3和PARP）的剪切均会被部分下调。 研究结论： DHR能抑制人浆细胞增殖并使细胞周期阻滞在G0/G1期，且通过激起内质网应激和激活p38通路引起人浆细胞的凋亡。
【图文】：

一部分 双氢鱼藤酮抑制人浆细胞增殖并使细胞周滞止在 G0/G1 期1．双氢鱼藤酮对人浆细胞的增殖抑制作用用不同浓度 DHR(图 1A)处理恶性人浆细胞系（LP1、 KMS11、 H9MI-8226、KMS12 和 MM.1S）72 小时后，通过 MTT 试验检测 DHR 对浆的影响。图 1B 显示，随着给药浓度的增加，细胞存活率下降，由此可见 效抑制浆细胞的增殖。

2． 双氢鱼藤酮使人浆细胞细胞周期阻滞在 G0/G1 期不同浓度 DHR 处理 LP1 和 KMS11 细胞 24 小时后，用 PI 染色接着流式细胞技术分析。DHR 引起了 G0/G1 期细胞的增加（图 2）。在 LP1 细胞中，G0/G1 期细胞从DMSO对照组65%增加到82%（15 μM DHR处理），同时S期细胞从23.85减少到 9.80%。在 KMS11 细胞中，G0/G1 期细胞从 DMSO 对照组 45.91%增加到56.30%（15 μM DHR 处理）。因此，DHR 使浆细胞细胞周期阻滞在了 G0/G1 期，并阻止细胞进入 S 期。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R114

【共引文献】

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本文编号：2557050