出生前DEHP暴露对大鼠下丘脑三种生殖功能调控相关蛋白表达的影响

发布时间：2019-11-08 14:36

【摘要】：目的:通过检测出生前DEHP暴露对成年后大鼠下丘脑前腹侧室旁核(anteroventral periventricular nucleus,AVPV)和视前内侧核(medial preoptic nucleus,MPN)与生殖内分泌调控相关的雌激素受体α(estrogen receptor alpha,ERα)、Kisspeptin和芳香化酶(aromatase,CYP19)蛋白表达的影响,探讨出生前DEHP暴露对大鼠生殖神经中枢的潜在干扰作用。方法:本研究将32只孕鼠按体重随机分为4个剂量组:玉米油溶剂对照组、2 mg/kg、10 mg/kg和50 mg/kg DEHP剂量组,每组8只孕鼠。按1m L/100g体重的灌胃体积,自大鼠孕14天至孕19天(G14至G19)期间对孕鼠进行灌胃染毒。子代大鼠出生后第一天记为PND0,在PND21断乳时雌、雄大鼠分笼饲养。饲养至成年时(PND70),每窝随机选取1只子代大鼠(每组雌、雄各8只),4%多聚甲醛心脏灌流固定,取包含有下丘脑的脑组织用振动切片机切为40μm厚的脑切片。根据大鼠脑立体定位图谱,确定下丘脑AVPV核区和MPN核区的位置,每只大鼠挑选相同层面的一张脑切片用于检测。脑切片采用免疫荧光组织化学法检测下丘脑AVPV核区和MPN核区ERα、Kisspeptin和CYP19的蛋白表达水平。采用激光共聚焦显微镜对脑切片进行分层扫描,每张脑切片以1μm为间隔扫描10张图像进行分析。采用Image J 1.46r软件对图像进行处理,计算每张图像的光密度值后,用SPSS统计软件进行单因素方差分析和LSD检验,比较各处理组间三种蛋白表达水平的差异。结果:(1)雄性大鼠各DEHP处理组间AVPV核区ERα蛋白表达水平差异无统计学意义。雌性大鼠各DEHP处理组间AVPV核区ERα蛋白表达水平差异有统计学意义,与对照组相比,2 mg/kg DEHP处理组ERα蛋白表达水平降低(P=0.023),10 mg/kg DEHP处理组ERα蛋白表达水平有降低的趋势(P=0.052)。(2)雄性大鼠各DEHP处理组间AVPV核区Kisspeptin蛋白表达水平差异无统计学意义。雌性大鼠各DEHP处理组间AVPV核区Kisspeptin蛋白表达水平差异有统计学意义,与对照组相比,2mg/kg DEHP处理组Kisspeptin蛋白表达水平有降低的趋势(P=0.060),10 mg/kg和50 mg/kg DEHP处理组Kisspeptin蛋白表达水平降低(P=0.012和P=0.040)。(3)雄性和雌性大鼠各DEHP处理组间AVPV核区CYP19蛋白表达水平差异无统计学意义。(4)雄性和雌性大鼠各DEHP处理组间MPN核区ERα蛋白表达水平差异无统计学意义。(5)雄性和雌性大鼠各DEHP处理组间MPN核区CYP19蛋白表达水平差异无统计学意义。结论:(1)出生前DEHP暴露可降低成年后雌性大鼠AVPV核区ERα及Kisspeptin的表达,未发现对成年后雄性大鼠AVPV核区ERα及Kisspeptin表达水平的影响;(2)本研究条件下,未发现出生前DEHP暴露对成年后大鼠AVPV核区CYP19表达的影响;(3)本研究条件下,未发现出生前DEHP暴露对成年后大鼠MPN核区ERα和CYP19表达的影响;(4)出生前DEHP暴露对成年后大鼠AVPV核区ERα及Kisspeptin表达的影响表现为性别差异性,并且对ERα的影响呈现低剂量效应。
【图文】：

采用 Olympus FV1000 型激光扫描共聚焦显微镜在 488 nm 激发光波长下观察免疫荧光组织化学脑片，所有大鼠脑片在镜下扫描参数保持一致。首先在 10倍镜下找到AVPV核区及MPN核区位置后在40倍镜下进行断层扫描（见图1.1）。每张脑片扫描 10 个层面，，每层间隔 1μm，总厚度为 9 μm。图 1.1 免疫荧光切片核区位置（10×）（黄色标记区域为 AVPV 核区及 MPN 核区，红色标记区域为断层扫描区域，3V 为第三脑室）每张脑片 10 个层面的图像采用 Image J 1.46r 软件进行处理并分析，分析过程如下：（1）将图片转化为 8 bit 格式图片后翻转（Invert）；（2）打开分析菜单中的校准选项，选择未校准的 OD 值（Analyze > Calibrate > Uncalibrated OD）；（3）打开分析菜单中的选择测量参数对话框，选择面积、平均灰度值、积分光密度值等选项。（4）打开选区编辑器设置选区（Region of Interest Manager

2.1 出生前 DEHP 暴露对大鼠下丘脑 AVPV 核区 ERα、Kisspeptin 和CYP19 表达的影响.1.1 出生前 DEHP 暴露对大鼠下丘脑 AVPV 核区 ERα蛋白表达的影响各 DEHP 处理组雄性和雌性大鼠下丘脑 AVPV 核区 ERα荧光强度见图 210×）和图 2.2（40×）。由图 2.3 可见，各 DEHP 处理组雄性大鼠下丘脑 AVP区 ERα蛋白表达水平差异无统计学意义（F = 0.226，P = 0.878）。各 DEHP 处组雌性大鼠下丘脑 AVPV 核区 ERα蛋白表达水平差异有统计学意义（F = 3.62 = 0.031），与对照组相比，2 mg/kg DEHP 处理组 ERα蛋白表达水平约降低 44%P = 0.023），10 mg/kg DEHP 处理组 ERα蛋白表达水平有降低的趋势（P .052）。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R114

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 刘晓霞;翟曜耀;赵越;;雌激素受体ERα的功能调控及相关疾病的研究进展[J];中国细胞生物学学报;2011年01期

2 董朝轩;关云谦;张愚;;雌激素与神经系统发育[J];生理科学进展;2006年02期

相关硕士学位论文 前4条

1 黄玉敬;出生前DEHP暴露对大鼠下丘脑神经内分泌功能相关基因表达的影响[D];天津医科大学;2016年

2 张钰;出生前DEHP暴露对子代雄性大鼠生殖系统发育和功能的影响[D];天津医科大学;2015年

3 罗清清;雌激素和双酚A快速影响发育中大鼠海马NMDA受体活性及其机制[D];浙江师范大学;2010年

4 叶银萍;双酚A对大鼠海马神经元树突发育的影响及其分子机制[D];浙江师范大学;2010年

本文编号：2557894