职业铝接触工人NMDAR和Ⅰ组mGluRs与认知功能改变的研究

发布时间：2019-12-05 00:18

【摘要】：目的:(1)探讨慢性职业性铝接触工人认知功能改变及对外周血淋巴细胞NMDAR和Ⅰ组mGluRs表达的影响,讨论NMDAR和Ⅰ组mGluRs作为认知功能改变的外周替代标志物的可能性;(2)探讨慢性铝暴露影响外周血淋巴细胞和脑皮质NMDAR和Ⅰ组mGluRs表达改变是否一致。方法:1.人群流行病学调查部分:1)采用整群抽样法,选取121名电解铝车间工人和231名热电车间和后勤部门工人为研究对象。采用健康调查表收集工人一般情况资料,采用综合神经心理测试量表检测工人认知功能状况,包括简易精神状态检查量表(MMSE)、画钟试验(CDT)、物体记忆测验(FOM)、言语流畅性试验(VFT)、数字广度试验(DST,包括DSF、DSB)。2)应用石墨炉原子吸收法(GFAAS)测定血浆铝含量作为内暴露指标。应用ELISA法测定外周血淋巴细胞NMDAR和Ⅰ组mGluRs蛋白表达含量。2.动物体内实验部分:1)选取32只健康雄性SD大鼠,根据体重随机分组,对照组、铝低、铝中、铝高剂量组,分别饲以生理盐水、20、120、720 mg/L AlCl3饮水,慢性染毒360天。染毒实验结束后,应用Morris水迷宫试验进行大鼠学习记忆能力评价。2)应用GFAAS检测大鼠血浆铝含量及脑皮质铝含量,应用RT-PCR和琼脂糖凝胶电泳检测NMDAR和Ⅰ组mGluRs基因表达,应用ELISA法检测NMDAR和Ⅰ组mGluRs蛋白表达量。结果:1.人群流行病学调查:1)研究对象结合血浆铝含量和工种分为对照组[58.15(10.10,88.36)μg/l]、低血浆铝组[113.19(88.84,139.24)μg/l]、中血浆铝组[167.43(139.30,203.69)μg/l]、高血浆铝组[254.62(205.69,374.55)μg/l],各组血浆铝含量显著高于对照组(p0.01)。2)对人群一般情况分析,调查对象均为男性,对四组工人年龄、工龄、文化水平、人均收入水平、吸烟史、饮酒史等组间比较无统计学差异(p0.05)。认知功能量表及神经心理测试结果比较,mmse、cdt、fom得分组间比较,p0.05,dst、dsf、dsb、vft得分组间比较,p0.05,对mmse多维度分析比较,回忆能力得分组间有差异(p0.05)。对认知功能影响因素进行多元逐步回归分析,血浆铝、文化水平、年龄为认知功能的主要影响因素;3)外周血淋巴细胞检测nmdar和Ⅰ组mglurs蛋白表达含量,随血浆铝含量增高,外周血淋巴细胞nmdar1、nmdar2a蛋白表达量下降(p0.05),高血浆铝组蛋白表达量显著低于对照组(p0.05),mglur1蛋白表达量随血浆铝增高而增高(p0.05),组间比较nmdar2b蛋白表达量和mglur5蛋白表达量均无统计学差异(p0.05)。4)对nmdar1、nmdar2a、mglur1蛋白表达量与血浆铝含量、认知功能指标进行相关分析,nmdar1蛋白表达量与血浆铝含量相关系数r=-0.475(p0.05),nmdar2a蛋白表达量与血浆铝含量相关系数r=-0.692(p0.05),mglur1蛋白表达量与血浆铝含量相关系数r=0.756(p0.05)。nmdar1蛋白表达量与dsf、dsb、dst、vft相关系数r分别为0.213、0.249、0.271、0.228(p0.05),nmdar2a蛋白表达量与vft相关系数r=0.206(p0.05),与dsf、dsb、dst相关系数分别为0.070、0.071、0.084(p0.05),mglur1蛋白表达量与dsf、dsb、dst、vft相关系数分别为-0.026、0.039、0.005、-0.114(p0.05);5)按认知功能影响因素分组比较,在文化水平组间和年龄组间比较nmdar1、nmdar2a蛋白表达量,p0.05;在血浆铝组间比较蛋白表达量,p0.05。2.动物体内实验部分:1)定位航行试验结果显示,大鼠随学习时间的增加表现出逃避潜伏期呈缩短趋势,而随染铝剂量增加逃避潜伏期延长(p0.05),铝高剂量组逃避潜伏期较对照组和铝低剂量组明显延长(p0.05)。空间探索试验结果,与对照组比较,随染铝剂量增加大鼠穿越平台次数减少(p0.05),铝中、高剂量组穿越平台次数低于铝低剂量组(p0.05);与对照组比较,随着染铝剂量增加大鼠在目标象限停留时间缩短(p0.05),铝高剂量组低于对照组和铝低剂量组(p0.05)。2)血浆铝和脑皮质铝含量测定结果,各剂量组高于对照组(P0.05)。3)脑皮质基因相对表达量,NMDAR1基因表达量随着铝剂量升高呈下降,铝中、高剂量组均低与对照组(P0.05);NMDAR2A、NMDAR2B、mGluR1、mGluR5基因表达量随染铝剂量增加呈下降趋势(P0.05)。外周血淋巴细胞基因相对表达量,铝中、高剂量组NMDAR1基因表达量低于铝低剂量组和对照组(P0.05)。脑皮质NMDAR1蛋白含量检测,铝高剂量组低于对照组、铝低剂量组(P0.05)。淋巴细胞NMDAR1蛋白含量检测,铝中、高剂量组低于对照组、铝低剂量组(P0.05)。对大鼠脑皮质与淋巴细胞NMDAR1蛋白含量进行相关性分析,相关系数r=0.646(P0.05)。RT-PCR检测大鼠外周血淋巴细胞NMDAR2A、NMDAR2B、mGluR1、mGluR5基因未有良好扩增曲线。结论:1.工人长期职业性铝接触可损害其认知功能,且短时记忆损害较为突出;2.人群外周血淋巴细胞NMDAR1、NMDAR2A、mGluR1蛋白表达量与血浆铝含量之间存在相关性,NMDAR1、NMDAR2A与认知功能指标之间存在相关性,二者可作为认知功能损害的外周替代标志物进一步观察分析;3.慢性铝暴露大鼠外周血淋巴细胞与脑皮质NMDAR1蛋白表达.随染铝剂量增加均下降,二者之间存在相关性,可将NMDAR1作为学习记忆能力损害的外周生物标志物进行观察;未能验证淋巴细胞与脑皮质中NMDAR2A、NMDAR2B、mGluR1、mGluR5之间的相关性。
【图文】：

曲线,基因扩增,皮质,曲线

山西医科大学硕士学位论文外周血淋巴细胞基因相对表达量测定，NMDAR1 基因相对表达量随染铝剂量增加而降低（P<0.05），NMDAR2A、NMDAR2B、mGluR1、mGluR5 在 RT-PCR 中未获得良好扩增结果，对 PCR 产物进行琼脂糖凝胶电泳实验，紫外光照射在扩增长度处无荧光信号。表 24 大鼠淋巴细胞 NMDAR1 基因相对表达量动物数（只） NMDAR1对照组 8 1.00±0.00铝低剂量组 8 0.93±0.14铝中剂量组 8 0.45±0.02ab铝高剂量组 8 0.35±0.01ab注：与对照组比较，aP<0.05，与低剂量组比较，bP<0.05，与中剂量组比较，cP<0.05。

熔解曲线,皮质,低剂量,基因

山西医科大学硕士学位论文外周血淋巴细胞基因相对表达量测定，NMDAR1 基因相对表达量随染铝剂量增加而降低（P<0.05），，NMDAR2A、NMDAR2B、mGluR1、mGluR5 在 RT-PCR 中未获得良好扩增结果，对 PCR 产物进行琼脂糖凝胶电泳实验，紫外光照射在扩增长度处无荧光信号。表 24 大鼠淋巴细胞 NMDAR1 基因相对表达量动物数（只） NMDAR1对照组 8 1.00±0.00铝低剂量组 8 0.93±0.14铝中剂量组 8 0.45±0.02ab铝高剂量组 8 0.35±0.01ab注：与对照组比较，aP<0.05，与低剂量组比较，bP<0.05，与中剂量组比较，cP<0.05。
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R135

【参考文献】