燕麦生物碱对IgE介导的肥大细胞脱颗粒的影响

发布时间：2020-03-29 03:44

【摘要】：I型超敏反应是Ig E介导的过敏反应,目前主要的治疗药物包括抗组胺药、白三烯阻断药、肥大细胞稳定剂和糖皮质激素等,但这些药物都对人体有一定的副作用。燕麦生物碱是来源于可食用的谷物燕麦中的一种生物活性化合物,在抗炎、抗氧化、抗瘙痒和抗癌等方面有重要作用,并且燕麦生物碱的化学结构与抗组胺的药物曲尼司特十分相似。因此,本研究采用RBL-2H3细胞模型和动物被动皮肤过敏模型评估燕麦生物碱对I型超敏反应中RBL-2H3细胞脱颗粒作用的影响,期望寻找到一种食源性的健康无副作用的抗过敏活性物质。本论文研究包括燕麦总生物碱的提取与纯化,燕麦生物碱对大鼠嗜碱性粒细胞RBL-2H3脱颗粒的影响以及燕麦生物碱对Ig E介导的被动皮肤过敏反应的影响。主要研究方法、结果与结论如下:1.建立了乙醇浸提法制备燕麦总生物碱的最佳工艺条件:乙醇体积分数是80.88%,料液比(g/m L)1:20,提取时间2.05 h,提取温度61.86℃。燕麦总生物碱经溶剂提取法粗提后的平均提取率达15.85%,经AB-8大孔树脂纯化后得率为21.88%。2.通过CCK8细胞增殖毒性试剂盒检测10-3-200μM浓度的燕麦生物碱对RBL-2H3细胞的增殖毒性作用,发现各浓度的燕麦生物碱对RBL-2H3细胞作用后,其细胞增殖率均维持在97%-101%之间,与不加燕麦生物碱的空白组相比没有显著性差异(P0.05),由此说明燕麦生物碱对RBL-2H3细胞无增殖毒性。3.采用不同浓度的燕麦生物碱处理RBL-2H3细胞,检测细胞预合成物质β-HEX和组胺的释放量。结果显示100μM的燕麦总生物碱、120μM的燕麦生物碱A、B和C对RBL-2H3细胞作用后,β-HEX的释放率分别为19.5%、26.2%、20%和19.8%,与其对照组的释放率43.6%相比抑制效果显著(P0.05)。组胺的释放率分别为:21.2%、23.6%、35.1%和34.3%,与其对照组的释放率54.28%相比,也有显著的抑制释放效果(P0.05);但30μM的燕麦生物碱A、B和C作用于细胞后,β-HEX的释放率和组胺的释放率分别在40%和55%以上,对二者释放的抑制效果不明显(P0.05)。4.采用不同浓度的燕麦生物碱处理RBL-2H3细胞,检测胞内新合成物质TNF-α和IL-6的释放量。结果显示100μM的燕麦总生物碱和120μM的燕麦生物碱A、B和C作用细胞后,TNF-α的释放量分别为130.5 pg/m L、151.7 pg/m L、160.2 pg/m L和155.6 pg/m L,与对照组243.6 pg/ml相比均有显著降低(P0.05);IL-6的的释放量分别为376 pg/m L、380.6 pg/m L、441.3 pg/m L和387 pg/m L,较对照组548.7 pg/m L显著降低(P0.05)。60μM和30μM的燕麦生物碱作用于细胞后,TNF-α和IL-6的释放量也在减少,但释放量比高浓度的燕麦生物碱低。由此说明燕麦生物碱能显著抑制TNF-α和IL-6的释放,且浓度越高抑制效果越好。5.通过荧光钙离子检测,观察不同浓度燕麦生物碱B处理的RBL-2H3细胞活化脱颗粒后胞内钙离子含量的变化。结果显示燕麦生物碱浓度越高,荧光强度越弱,表明燕麦生物碱B可降低细胞内Ca2+含量,抑制细胞的活化脱颗粒现象。6.RBL-2H3细胞分别经120μM燕麦生物碱B和100μM燕麦总生物碱处理后,采用Western blot法检测细胞活化脱颗粒时Lyn、Syk、NF-κB和MAPK家族的P38的磷酸化程度。结果显示:与对照组比较,燕麦生物碱可减少磷酸化蛋白P-Lyn、P-Syk、P-NF-κB、P-P38的表达量,而对Lyn、Syk、NF-κB和P38的表达量无明显影响。7.通过小鼠被动皮肤过敏试验发现,30μM,60μM和120μM的燕麦生物碱B可显著改善过敏反应导致的毛细血管通透性增高(P0.05),且随浓度增大而效应增强。综上所述,基于RBL-2H3细胞试验和小鼠被动性皮肤过敏试验结果,表明燕麦生物碱可有效抑制Ig E介导的肥大细胞的脱颗粒,具有一定的抗过敏作用。
【图文】：

信号通路,肥大细胞,信号转导通路,酪氨酸激酶

图 1.1 肥大细胞中 IgE/FcεRI 介导的信号通路Figure 1.1 IgE/FcεRI-mediated signaling pathway in mast cells.1 酪氨酸激酶 Lyn 介导的信号转导通路

燕麦,乙醇,体积分数

图 2.1 乙醇体积分数对燕麦总生物碱提取率的影响ffect of ethanol volume fraction on extraction rate of total avenanthramides 比对燕麦总生物碱提取率的影响
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：O629.3;R151

【参考文献】