氧化应激介导三氯乙烯致敏小鼠肾脏血管内皮细胞损伤

发布时间：2020-05-17 01:57

【摘要】：研究背景三氯乙烯(Trichloroethylene TCE)是一种有机溶剂,具有挥发性。职业中TCE长期接触者出现职业性三氯乙烯药疹样皮炎(occupational dermatitis medicamentosa-like of trichloroethylene,ODMLT)。一般ODMLT被认为是T淋巴细胞介导的迟发型变态反应,但无法完全解释该病的发病过程。部分临床ODMLT患者出现了较为严重的肾脏损伤,肾脏损伤是该病临床病死率高的主要原因之一,这提示ODMLT可能还存在除迟发性变态反应以外的发病机制,肾脏损伤的机制尤为重要。研究发现长期的TCE低浓度接触后,在人和小鼠体内均出现氧化应激指标的升高,提示导致肾脏损伤的原因可能是肾脏出现氧化应激状态。研究表明氧化应激状态与内皮细胞相关黏附分子的表达异常关系密切,黏附分子的异常表达也可加重脏器的损伤。本研究通过腹腔注射四甲基哌啶(4-Hydroxy-TEMPO,Tempol)调节致敏小鼠氧化应激状态,尝试解释氧化应激在TCE致敏小鼠肾血管内皮细胞损伤中的作用。研究目的本研究在TCE致敏模型基础上腹腔注射一种超氧化物清除剂Tempol,检测小鼠肾脏氧化应激指标,以及内皮细胞相关黏附分子的表达情况,探讨氧化应激在TCE致敏小鼠肾血管内皮细胞损伤中的作用。研究方法雌性6-8周清洁级BALB/c小鼠40只。随机分成四组,空白组(5只)、溶剂组(5只)、TCE组(15只)、TCE+Tempol组(15只),采用课题组沿用的TCE小鼠模型建模,末次激发处理之前30分钟TCE+Tempol组腹腔注射Tempol。末次激发处理后24h根据皮肤反应进行评分,并划分致敏组和非致敏组,72小时眼球取血、无菌取肾脏。检测血清肌酐(Cre)、尿素氮(BUN);HE染色检测肾脏病理;组化法检测肾脏e NOS、VCAM-1、ICAM-1以及E-selectin表达;试剂盒检测肾脏NOS、NO水平,以及SOD、MDA水平;Western Blot法检测肾脏VCAM-1、ICAM-1和E-selectin蛋白的表达;RT-PCR检测ICAM-1、VCAM-1和E-selectin的基因转录水平。研究结果1皮肤致敏:空白、溶剂组小鼠背部皮肤未出现水肿和红斑,TCE组致敏率为40%(6/15),TCE+Tempol组致敏率为33.3%(5/15),差异无统计学意义(P0.05)。2肾功能检测:血清Cre和BUN在空白组、溶剂组、未致敏组差异无统计学差异;与溶剂组相比,TCE致敏组和TCE+Tempol致敏组Cre和BUN升高;TCE致敏组Cre和BUN值相对TCE+Tempol致敏组升高,差异有统计学意义(P0.05)。3肾脏病理:空白、溶剂和非致敏组未发现明显的肾脏病理学变化;TCE致敏组肾小管部位出现细胞空泡样改变,上皮细胞部分发生溶解;TCE+Tempol致敏组出现少量细胞空泡样变性,上皮细胞溶解,相比TCE致敏组有明显改善。4肾脏NO/NOS/SOD水平:肾脏NO、NOS和SOD水平在空白组、溶剂组、未致敏组差异无统计学意义;与溶剂组相比,TCE致敏组和TCE+Tempol致敏组NO、NOS和SOD水平降低;TCE致敏组NO、NOS和SOD水平相对TCE+Tempol致敏组降低,差异有统计学意义(P0.05)。5肾脏MDA水平:MDA在空白组、溶剂组、未致敏组差异无统计学意义;与溶剂组相比,TCE致敏组和TCE+Tempol致敏组MDA水平升高;TCE致敏组MDA值相对TCE+Tempol致敏组升高,差异有统计学意义(P0.05)。6肾脏e NOS沉积水平:空白、溶剂和非致敏组e NOS大量表达,而TCE致敏组仅肾小管有少量表达,TCE+Tempol致敏组肾小球和肾小管均有少量表达。7肾脏E-selectin、VCAM-1、ICAM-1蛋白水平:检测发现空白组、溶剂组、未致敏组可见少量的E-selectin、VCAM-1和ICAM-1表达,TCE致敏组和TCE+Tempol致敏组表达均明显升高,TCE致敏组相对TCE+Tempol致敏组表达较高。8肾脏E-selectin、VCAM-1和ICAM-1转录水平:肾脏E-selectin、VCAM-1以及ICAM-1转录水平在空白组、溶剂组以及未致敏组之间差异均无统计学意义;与溶剂组相比,TCE致敏组和TCE+Tempol致敏组E-selectin、VCAM-1、ICAM-1转录水平升高,TCE致敏组E-selectin转录水平较TCE+Tempol致敏组升高,差异有统计学意义(P0.05)。TCE致敏组和TCE+Tempol致敏组VCAM-1、ICAM-1转录水平差异无统计学意义。结论1 TCE致敏组肾脏出现氧化应激相关指标的升高,TCE介导的肾损伤与氧化应激有关。2腹腔注射Tempol可通过降低肾脏氧化应激水平减轻TCE介导的肾损伤。3 TCE+Tempol致敏组相对TCE致敏组黏附分子表达有所下降,说明氧化应激状态改善可减轻肾脏内皮细胞损伤。4 ICAM-1和VCAM-1在致敏组转录水平无差异,提示Tempol降低两种蛋白的表达水平,并不依赖于ICAM-1和VCAM-1转录水平的下降。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R135

【参考文献】