TBBPA及其衍生物对BeWo细胞活性和类固醇激素分泌的影响

发布时间：2020-05-18 20:08

【摘要】：目的:本研究旨在探讨新兴污染物TBBPA及其衍生物TBBPA-BHEE、TBBPABGE、TBBPA-BAE和TBBPA-BDBPE对人胎盘BeWo细胞增殖活性的影响,并检测TBBPA和TBBPA-BHEE对BeWo细胞ATP含量和线粒体膜电位的影响,以探索TBBPA和TBBPA-BHEE线粒体相关胎盘毒性机制;本研究重点关注TBBPA和TBBPA-BHEE对BeWo细胞孕烯醇酮和孕激素分泌水平的影响,并探讨TBBPA和TBBPA-BHEE对BeWo细胞类固醇激素生成关键酶基因和蛋白表达的影响,以探索TBBPA和TBBPA-BHEE对人胎盘细胞类固醇激素分泌的影响机制。方法:1.采用MTS法检测0-100μM的TBBPA、TBBPA-BHEE、TBBPA-BGE和TBBPA-BDBPE及0-50μM TBBPA-BAE染毒处理24 h和48 h对BeWo细胞增殖活性的影响。2.检测0、0.05、1、10和100μM的TBBPA和0、0.05、1、10和25μM的TBBPA-BHEE分别染毒处理48 h对BeWo细胞线粒体膜电位的影响。3.检测0、0.05、1、10和100μM的TBBPA和0、0.05、1、10和25μM的TBBPA-BHEE分别染毒处理48 h对BeWo细胞内ATP含量的影响。4.采用ELISA技术检测0、0.05、1、10和100μM的TBBPA和0、0.05、1、10和25μM的TBBPA-BHEE分别染毒处理BeWo细胞48 h后,含毒培养基中孕烯醇酮和孕激素的水平。5.采用qPCR方法检测0、0.05、1、10和100μM的TBBPA和0、0.05、1、10和25μM的TBBPA-BHEE分别染毒处理BeWo细胞48 h后,BeWo细胞内cyp11a1和3β-hsd基因mRNA的表达水平。6.采用Western Blot实验检测0、0.05、1、10和100μM的TBBPA和0、0.05、1、10和25μM的TBBPA-BHEE分别染毒处理BeWo细胞48 h后,BeWo细胞内CYP11A1和3β-HSD的蛋白表达水平。结果:1.MTS检测结果发现,与对照组相比,TBBPA、TBBPA-BHEE、TBBPA-BGE和TBBPA-BAE分别染毒处理24 h和48 h对BeWo细胞增殖活性具有明显的抑制作用;0-100μM TBBPA-BDBPE染毒处理24 h对BeWo细胞增殖活性无明显影响,0.1-100μM TBBPA-BDBPE染毒处理48 h可轻度抑制BeWo细胞的增殖活性。2.与对照组相比,100μM的TBBPA和10、25μM的TBBPA-BHEE分别染毒处理48 h均能诱导BeWo细胞线粒体膜电位去极化。3.与对照组相比,100μM的TBBPA和10、25μM的TBBPA-BHEE分别染毒处理48 h均显著降低BeWo细胞内ATP的含量。4.与对照组相比,100μM的TBBPA染毒处理48 h可显著增加BeWo细胞分泌的孕烯醇酮和孕激素水平,分别增加2.54和2.07倍;0-25μM的TBBPABHEE染毒处理BeWo细胞48 h可剂量-依赖性的促进孕烯醇酮和孕激素的分泌,0.05、1、10和25μM TBBPA-BHEE可使孕烯醇酮水平分别增加1.10、1.22、1.54和3.04倍,使孕激素水平分别增加1.06、1.22、1.58和1.61倍。5.qPCR检测cyp11a1和3β-hsd基因mRNA的表达水平发现,与对照组相比,100μM的TBBPA和10、25μM的TBBPA-BHEE可轻度上调cyp11a1基因mRNA的表达水平,0-100μM的TBBPA对3β-hsd基因mRNA的表达水平无明显影响,10和25μM的TBBPA-BHEE显著下调3β-hsd基因mRNA的表达水平。6.Western Blot检测CYP11A1和3β-HSD的蛋白表达水平的研究结果发现,与对照组相比,0-100μM的TBBPA和0-25μM的TBBPA-BHEE分别染毒处理48 h对BeWo细胞CYP11A1和3β-HSD的蛋白表达均无明显影响。结论:1.0-100μM的TBBPA、TBBPA-BHEE及TBBPA-BGE和0-50μM的TBBPABAE可剂量-和时间-依赖性的抑制BeWo细胞的增殖活性,五种实验化合物对胎盘BeWo细胞的毒性大小顺序为:TBBPA-BHEETBBPA-BAETBBPA-BGETBBPATBBPA-BDBPE,毒性大小机制不完全依赖于化合物的疏水性大小。2.TBBPA和TBBPA-BHEE可通过诱导线粒体膜电位去极化和降低细胞内ATP含量介导BeWo细胞毒性,且TBBPA和TBBPA-BHEE可能是诱导BeWo细胞凋亡的激动剂。3.TBBPA和TBBPA-BHEE是潜在的内分泌干扰物,可刺激胎盘BeWo细胞分泌孕烯醇酮,并可通过提高孕烯醇酮的分泌水平刺激孕激素分泌增加。4.TBBPA和TBBPA-BHEE促进孕烯醇酮和孕激素分泌的机制与类固醇激素生成关键酶CYP11A1和3β-HSD表达无关。但TBBPA和TBBPA-BHEE促进孕激素分泌的机制在一定程度上与孕烯醇酮分泌增加有关。
【图文】：

BPA 及其衍生物分别染毒 24 h 和 48 h 对 BeWo 细胞增殖活PA 分别染毒 24h 和 48h 后的细胞活性；B：TBBPA-BHEE h 后的细胞活性；C：TBBPA-BGE 分别染毒 24 h 和 48 h 后A-BAE 分别染毒 24 h 和 48 h 后的细胞活性；TBBPA-BDBP 48h 后的细胞活性。注：*表示与 Control 组相比，P<0.05；暴露浓度下，，48 h 染毒组和 24 h 染毒组相比，P < 0.05）PA 及其四种衍生物分别染毒处理 BeWo 细胞 24h 和 48h 的 TBBPA TBBPA-BHEE TBBPA-BGE TBBPA-BAE TB.58×10342.69 208.40 45.40 115.30 11.58 25.84 17.96 示无细胞活性抑制作用，未获得 IC50BPA 和 TBBPA-BHEE 对 BeWo 细胞线粒体膜电位的

1.2 TBBPA 和 TBBPA-BHEE 染毒 48 h 对 BeWo 细胞线粒体膜电位的影（注：CCCP 10 μM 为阳性对照组；*表示与 Control 组相比，P < 0.05）2.3 TBBPA 和 TBBPA-BHEE 对 BeWo 细胞内 ATP 含量的影响以 0、0.05、1、10、100μMTBBPA 和 0、0.05、1、10、25μMTBBPA-B别染毒处理 BeWo 细胞 48 h 后，检测细胞中 ATP 含量的变化情况。结果 所示，与对照组相比，0.05 和 1 μM TBBPA 染毒处理 48 h 对 BeWo 细P 含量无明显影响，10 μMTBBPA 染毒处理可使 BeWo 细胞内 ATP 含量高，100 μM TBBPA 染毒处理则引起 BeWo 细胞内 ATP 含量明显下降，有统计学意义（P<0.05）；与对照组相比，0.05μMTBBPA-BHEE 染毒处理 ATP 含量无明显影响，1 μM TBBPA-BHEE 有诱导 ATP 含量下降的趋差异不具有统计学意义（P > 0.05），10 和 25 μM TBBPA-BHEE 可显著Wo 细胞内的 ATP 含量（P<0.05），且染毒浓度越高，效应越明显；在相条件下，10 μM TBBPA 和 TBBPA-BHEE 对 BeWo 细胞内 ATP 含量的影
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R114

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本文编号：2670252