DEHP对青春期大鼠下丘脑-垂体-甲状腺轴的毒性作用及其机制

发布时间：2020-07-12 09:17

【摘要】：目的:通过观察DEHP暴露对青春期大鼠甲状腺相关激素水平的影响,分析下丘脑-垂体-甲状腺轴调控甲状腺激素分泌基因和蛋白表达的关系,探讨DEHP对大鼠内分泌系统的毒性作用和机制,为人类甲状腺相关疾病的预防与治疗提供科学依据。方法:选择清洁级健康21日龄wistar大鼠80只,体重(55±5)g。随机分为4组,即对照组(玉米油)、低剂量组(5 mg/kg/d,1/6000 LD50)、中剂量组(50mg/kg/d,1/600 LD50)、高剂量组(500 mg/kg/d,1/60 LD50)。每组20只,雌雄各半。适应性饲养7天后,每日清晨灌胃1次,连续染毒4周。每日称重,记录摄食和饮水量。采用HE染色法观察下丘脑、垂体、甲状腺组织形态;采用ELISA法测定下丘脑TRH水平;采用放射免疫分析法测定血清中FT3、FT4、T3、T4、TSH水平;采用实时荧光定量PCR法测定下丘脑-垂体-甲状腺轴相关基因m RNA的表达;采用免疫组织化学法和Western Blot法观察和测定下丘脑-垂体-甲状腺轴相关蛋白的定位及表达。结果:1.DEHP对青春期大鼠的一般毒性(1)染毒前三周,各组大鼠体重差异无统计学意义(P0.05),染毒第四周,低剂量组大鼠体重明显高于对照组(P0.05),中、高剂量组大鼠体重明显低于低剂量组(P0.05)。。(2)染毒组大鼠摄食饮水量明显高于对照组(P0.05)。2.DEHP对青春期大鼠下丘脑-垂体-甲状腺轴组织的影响(1)DEHP染毒后,各组大鼠垂体和甲状腺脏器系数差异无统计学意义(P0.05)。(2)各组大鼠下丘脑神经胶质细胞、神经元细胞以及神经纤维结构正常。神经元胞体呈多角形,胞核大而圆,居中,核仁大、深染,胞质中充满深紫色小块或颗粒状尼氏体;神经胶质细胞胞体、胞核均较大;也可见少突胶质细胞,胞体小,呈圆或卵圆形。各组无明显差异。(3)各组大鼠垂体镜下均可见嗜酸性细胞、嗜碱性细胞、嫌色细胞和毛细血管。各组无明显改变。(4)各组甲状腺组织内为大量甲状腺滤泡,腔内胶状物染为红色。滤泡间有少量的结缔组织和丰富的毛细血管。低、中剂量组甲状腺组织与对照组比较没有明显差别;高剂量组甲状腺滤泡外形尚规则但体积变小,腔内胶质密度下降,滤泡上皮形态无异常。3.DEHP对青春期大鼠甲状腺相关激素水平的影响(1)DEHP染毒后,高剂量组大鼠下丘脑组织中TRH水平明显高于对照组和低剂量组(P0.05)。(2)大鼠血清中TSH含量随染毒剂量的增加而升高,但是各组比较差异无统计学意义(P0.05)。(3)大鼠血清中T4、T3、FT4和FT3水平随染毒剂量的增加而降低,高剂量组大鼠血清中上述激素水平明显低于对照组(P0.05)。4.青春期大鼠下丘脑-垂体-甲状腺轴相关基因m RNA表达情况(1)DEHP染毒后,高剂量组大鼠下丘脑组织中TRH m RNA表达水平明显高于对照组和低剂量组(P0.05)。(2)高剂量组大鼠垂体组织中TRHR m RNA表达水平明显高于对照组(P0.05);中剂量组大鼠垂体组织中TRHR m RNA表达水平明显高于对照组(P0.05)。(3)各组大鼠垂体TSH m RNA表达差异无统计学意义(P0.05)。(4)高剂量组大鼠甲状腺组织中TSHR m RNA表达水平明显低于对照组和低剂量组(P0.05)。5.青春期大鼠下丘脑-垂体-甲状腺轴相关蛋白表达情况(1)DEHP染毒组大鼠下丘脑组织中TRH免疫组化量化结果显示,高剂量组MOD明显高于对照组和中剂量组(P0.05)。Western Blot结果显示,高剂量组大鼠下丘脑TRH蛋白表达明显高于对照组和中剂量组(P0.05),低剂量组大鼠蛋白表达明显高于对照组和中剂量组(P0.05)。(2)DEHP染毒组大鼠垂体组织中TRHR免疫组化量化结果显示,高剂量组MOD明显高于对照组和低剂量组(P0.05)。Western Blot结果显示,高剂量组大鼠下丘脑TRHR蛋白表达明显高于对照组和中剂量组(P0.05)。(3)Western Blot结果显示,各组大鼠垂体TSH蛋白表达水平差异没有统计学意义。(4)DEHP染毒组大鼠垂体组织中TSHR免疫组化量化结果显示,高剂量组MOD明显低于对照组和低剂量组(P0.05)。Western Blot结果显示,高剂量组大鼠甲状腺TSHR蛋白表达明显低于对照组和低剂量组(P0.05)。中剂量组大鼠甲状腺TSHR蛋白表达明显低于对照组和低剂量组(P0.05)。结论:1.DEHP灌胃染毒可干扰青春期大鼠摄食和饮水量及体重增长情况,对大鼠生长发育产生影响。2.DEHP暴露后,青春期大鼠垂体和甲状腺组织脏器系数未见异常,但DEHP可对甲状腺产生组织形态学影响,3.青春期大鼠下丘脑-垂体-甲状腺轴内分泌调节受到DEHP干扰,下丘脑TRH激素水平升高,血清T4、T3、FT4和FT3激素水平随染毒剂量的升高而降低,存在剂量-反应关系。4.DEHP暴露可不同程度影响青春期大鼠下丘脑-垂体-甲状腺轴TRH、TRHR、TSH和TSHR m RNA的表达和蛋白的合成,破坏青春期大鼠内环境稳态,影响激素调节。5.DEHP具有内分泌毒性作用,可通过干扰青春期大鼠下丘脑-垂体-甲状腺轴的调节作用,影响甲状腺相关激素及其受体的合成和分泌,并对甲状腺组织产生毒性作用。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R114

【参考文献】