鼻饲营养品中氨基酸成分研究

发布时间：2020-07-22 09:29

【摘要】：鼻饲营养品是一类氨基酸含量较高且成分复杂的特殊医用配方食品,对其中氨基酸含量进行研究,即可为临床上量化营养支持效果和生产上进行产品质控提供方法,也可为进一步完善相关标准提供参考。本研究通过对衍生条件和色谱条件进行优化,成功建立了鼻饲营养品中21种氨基酸的高效液相分析方法。采用异硫氰酸苯酯(PITC)作为衍生剂,通过对衍生剂用量、萃取剂用量、衍生化反应时间和衍生化反应温度参数进行优化;衍生剂用量为1.0mL,萃取剂用量为4.0mL,反应时间为60 min,反应温度为室温时,氨基酸衍生化效果理想,且衍生物在48 h内保持稳定。通过对流动相、洗脱程序、色谱柱、峰型优化剂、柱温和流速等因素进行优化,流动相A为10 mmol/L磷酸缓冲液,流动相B为乙腈/甲醇/水(45/45/10),色谱柱为InertSil ODS-3(3.0 mm×100 mm,3μm),优化剂为0.15%三乙胺,柱温为40℃,流速为1.0 mL/min时,30 min内即可获得理想的氨基酸分离效果。方法学验证表明,21种氨基酸在0.01-20.0μmol/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.999,检出限为0.002-0.038μmol/L。在高、中、低三个添加水平下,方法重复性良好,分离效果理想。使用已建立的高效液相分析方法,对经前处理后的鼻饲营养品样品进行氨基酸含量测定。前处理方面,首先使用聚乙二醇/乙醇溶液(40/60)80 mL作为蛋白沉淀剂,然后建立阳离子交换树脂法对氨基酸进行分离纯化。当上柱液pH值为2.5,上柱液体积小于115 mL,流速为3柱体积/小时,洗脱液为3%氨水80 mL时,不同含量水平下21种氨基酸的回收率为62.48%-82.79%,回收效果理想。经前处理的样品测定结果表明,不同来源的4组样品中氨基酸含量差异明显。其中石药集团样品中氨基酸含量最为丰富;科室自配和东泽特医样品中氨基酸含量均衡,产品针对性强;恩特纽健样品中氨基酸含量较低且各氨基酸浓度不均衡。综上所述,本研究建立的鼻饲营养品中21种氨基酸含量测定方法具有线性范围广泛、重复性良好、回收率理想和定量准确等特点,可为产品质控和相关标准的制订与更新提供参考。
【学位授予单位】：长春理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R155.5
【图文】：

衍生化,异硫氰酸苯酯,强荧光,衍生物

需要使用衍生剂与氨基酸反应，生成具有强荧光/强紫外吸收的衍生物，以便于进行定量分析。本研究选用两种应用较为广泛的衍生剂 2,4-二硝基氟苯（C6H3FN2O4，FDNB）和异硫氰酸苯酯（C7H5NS，PITC）分别进行衍生化操作，并对比衍生化效果。FDNB与氨基酸的反应式如图 2.1 所示；PITC 与氨基酸的反应式如图 2.2 所示。

谱峰,衍生法,操作误差,标准工作液

条件即可进行，且操作便捷；相比之下 FDNB 衍生法在需要暗处 60 ℃水浴环境的同时，操作繁琐，需多次加入外来试剂，有增大操作误差的可能，也不利于进行优化。将标准工作液浓度降低为 0.2 μmol/L，分别使用上述步骤再次进行衍生化操作。通过对比 2 种氨基酸衍生化方法的 21 种氨基酸色谱峰面积，再次对 2 种方法做出评价（图 2.3）。

流动相,对分,乙酸钠水溶液,甲酸

衍生化操作步骤为：取样品 1 mL，加入 0.1 mol/L 异硫氰酸苯酯-乙腈溶液 1mL 和 1 mol/L 三乙胺-乙腈溶液 1mL，室温避光放置 1 小时。向反应液中加入 4mL 正己烷，涡旋振荡 5min。静置分层后取下层液，经 0.22 μm 有机相滤膜过滤后装入进样瓶中。2.3 色谱条件的建立2.3.1 流动相 A 的选择流动相溶剂类型和组成选择通常是色谱条件优化的最优先操作。本方法将流动相A 设为水相，目前氨基酸分析方法中水相流动相多为甲酸水溶液，乙酸钠水溶液和磷酸缓冲液。通过对比不同流动相 A 的分离效果，对方法适用流动相 A 进行确定。使用 2 μmol/L 标准工作液，流动相 A 分别设置为 0.2%甲酸水溶液、20 mmol/L乙酸钠水溶液和 20 mmol/L 磷酸缓冲液，其他液相条件参照 2.1.4 节（2），考察不同体积分数的甲酸水溶液对分离效果的影响（图 2.10）。

【参考文献】