食源性克罗诺杆菌（Cronobacter spp.）生物膜的抑制及毒力差异关键因子发掘

发布时间：2017-03-31 05:20

  本文关键词：食源性克罗诺杆菌（Cronobacter spp.）生物膜的抑制及毒力差异关键因子发掘，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：克罗诺杆菌作为重要的食源性致病菌,食用被污染的相关食品可引起新生婴幼儿脑膜炎、败血症以及小肠结肠炎等严重疾病。本文在对速冻食品和食用菌两类食品中的克罗诺杆菌进行污染调查的基础上,分离和鉴定克罗诺杆菌31株,并开展菌株抗生素敏感试验、抗渗透压及抗干燥能力的测定。基于目前克罗诺杆菌感染过程中相关的毒力因子仍尚不明确,本研究在分离菌株中开展动物病理实验研究,发现克罗诺杆菌菌株间毒力存在较大差异,分别选取毒力强弱菌株各一株(鉴定为阪崎克罗诺杆菌)开展乳鼠灌胃实验及病理组织切片分析。随后采用蛋白质双向电泳技术(2-D)开展毒力差异菌株的全菌蛋白质和膜蛋白质图谱的构建,并结合质谱技术和蛋白质数据库鉴定毒力差异菌株差异表达蛋白质,发现一些参与阪崎克罗诺杆菌毒力相关的潜在蛋白质,为阐明阪崎克罗诺杆菌致病机理奠定基础。细菌为应对环境压力通过形成生物膜而粘附于食品生产设备及环境表面,是食品被细菌持续污染的重要途径。本文开展不同的D/L型氨基酸对克罗诺杆菌生物膜形成的抑制研究,我们发现D型色氨酸对生物膜建成具有较高的抑制效果,并在此基础上开展阪崎克罗诺杆菌分离株的浮游态与生物膜态差异蛋白质组学研究,首次从蛋白质组学水平揭示与生物膜形成发展相关的因子,为阐明生物膜形成机理提供重要的基础数据。
【关键词】：克罗诺杆菌 污染调查 生物膜 致病因子 差异蛋白质组学
【学位授予单位】：合肥工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R155.3
【目录】：

• 致谢7-8
• 摘要8-9
• ABSTRACT9-15
• 第一章 绪论15-27
• 1.1 克罗诺杆菌的研究现状15-24
• 1.1.1 克罗诺杆菌的生物学特性15-18
• 1.1.2 克罗诺杆菌在食品及环境中的污染分布18-19
• 1.1.3 克罗诺杆菌生物膜形成影响因素及其分子机制19-21
• 1.1.4 克罗诺杆菌的毒力因子及致病机制21-23
• 1.1.5 克罗诺杆菌功能蛋白质组学23-24
• 1.2 本课题的研究背景、意义及主要内容24-27
• 1.2.1 选题研究背景、意义24
• 1.2.2 本课题研究的主要内容24-25
• 1.2.3 技术路线图25
• 1.2.4 项目资助25-27
• 第二章 合肥地区冷冻食品和食用菌中克罗诺杆菌的污染调查及其特征研究27-39
• 2.1 试验材料与仪器27-28
• 2.1.1 材料与试剂27
• 2.1.2 仪器与设备27-28
• 2.2 调查方案28
• 2.2.1 采样时间、地点及样品分布情况28
• 2.2.2 样品预处理28
• 2.3 检测方法28-30
• 2.3.1 检测流程28-29
• 2.3.2 操作步骤29-30
• 2.5 筛选菌株的生物学特性30-31
• 2.5.1 渗透压耐受实验30
• 2.5.2 干燥耐受实验30
• 2.5.3 药敏实验30-31
• 2.6 结果与分析31-38
• 2.6.1 总体污染情况及鉴定情况31-34
• 2.6.2 生物学特性34-38
• 2.7 本章讨论38-39
• 第三章 右旋氨基酸对阪崎克罗诺杆菌生物膜发展的抑制作用研究39-51
• 3.1 试验材料与仪器39-40
• 3.1.1 材料与试剂39
• 3.1.2 仪器与设备39-40
• 3.2 方法40-41
• 3.2.1 克罗诺杆菌分离株生物膜形成能力的测定40
• 3.2.2 不同浓度的D/L型氨基酸对克罗诺杆菌分离株生物膜形成的影响40
• 3.2.3 不同浓度D型色氨酸对克罗诺杆菌分离株生长的影响40-41
• 3.2.4 D型色氨酸对克罗诺杆菌分离株生物膜形成及发展的影响41
• 3.3 结果与分析41-49
• 3.4 本章讨论49-51
• 第四章 阪崎克罗诺杆菌在生物膜和浮游状态下的蛋白质表达差异研究51-69
• 4.1 菌株及培养条件51
• 4.2 试验材料与仪器51-53
• 4.2.1 材料与试剂51-52
• 4.2.2 仪器与设备52-53
• 4.3 主要试剂的配制53-54
• 4.4 方法54-56
• 4.4.1 全菌蛋白的提取制备及总蛋白的定量54
• 4.4.2 向电泳实验流程54-56
• 4.5 结果与分析56-67
• 4.5.1 2-DE图像分析56-57
• 4.5.2 关键差异蛋白质点的质谱分析及生物信息学检索57-67
• 4.6 本章讨论67-69
• 第五章 基于蛋白质组学阪崎克罗诺杆菌毒力相关因子研究69-107
• 5.1 阪崎克罗诺杆菌病理学研究69-74
• 5.1.1 菌株及实验动物69
• 5.1.2 试验材料与仪器69-70
• 5.1.3 方法70-71
• 5.1.4 结果与分析71-73
• 5.1.5 本节讨论73-74
• 5.2 克罗诺杆菌强毒株和弱毒株全菌蛋白的蛋白质表达差异74-92
• 5.2.1 菌株及培养条件74
• 5.2.2 试验材料与仪器74-76
• 5.2.3 主要试剂的配制76-77
• 5.2.4 方法77-80
• 5.2.5 结果与分析80-90
• 5.2.6 本节讨论90-92
• 5.3 克罗诺杆菌强毒株和弱毒株膜蛋白的差异表达研究92-107
• 5.3.1 菌株及培养条件92
• 5.3.2 试验材料与仪器92-93
• 5.3.3 主要试剂的配制93-94
• 5.3.4 方法94-97
• 5.3.5 结果与分析97-105
• 5.3.6 本节讨论105-107
• 第六章 结论与展望107-111
• 6.1 主要结论107-108
• 6.2 创新之处108
• 6.3 展望108-111
• 参考文献111-124
• 攻读硕士学位期间的学术活动及成果情况124

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 黄有国;一次成功的生物膜学术研讨会——第八次全国暨2003海内外生物膜学术研讨会[J];中国生物化学与分子生物学报;2003年03期

2 李学如,贾文祥,杨春;细菌生物膜的形成及其相关感染与防治[J];中国抗生素杂志;2003年01期

3 周廷冲;;生物膜在医学研究中的重要性(第二部分)[J];生理科学进展;1978年02期

4 谢晖;生物膜简介[J];医院药学杂志;1981年02期

5 张志鸿;;生物膜在日本的研究概况[J];国外医学(分子生物学分册);1982年04期

6 李鸣宇,刘正,朱彩莲;扫描同聚焦显微镜观察血链菌和粘性放线菌生物膜的形成[J];实用口腔医学杂志;2001年05期

7 徐蓉蓉,岳松龄,胡涛;生物膜中细菌的代谢特点及影响因素[J];国外医学.口腔医学分册;2004年01期

8 马瑞,朱敏,刘正;十二烷基硫酸钠对血链菌生物膜的作用[J];上海口腔医学;2005年05期

9 黄世杰;;生物膜和抗生素治疗:新释药系统对细菌耐药的抗衡[J];国外医学.药学分册;2006年01期

10 綦成;张春燕;亓庆国;;白色念珠菌生物膜形成的定量分析和形态学观察[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2006年12期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 郑波;;生物膜研究进展[A];第8届全国抗菌药物临床药理学术会议暨北京大学临床药理研究所成立三十周年论文集[C];2010年

2 Michael Gittins;;生物膜及其清除[A];中华护理学会第7届消毒供应中心发展论坛大会资料[C];2011年

3 于树云;宋诗铎;;万古霉素联合盐酸氨溴索对表葡菌生物膜干预作用的实验研究[A];中华医学会第七届全国呼吸道感染学术大会暨第一届多学科抗感染治疗学术研讨会论文汇编[C];2011年

4 隋森芳;;从分子到细胞——生物膜研究发展的动力[A];第七届全国生物膜学术讨论会论文摘要汇编[C];1999年

5 陈Oz;;生物膜与后基因组时代[A];后基因组时代的基因功能研究——青年科学家论坛第八十次活动论文集[C];2003年

6 吴骏逸;陆维昌;陈邦林;;新型悬浮材料上的生物膜降解氮的研究[A];中国化学会第十届胶体与界面化学会议论文摘要集[C];2004年

7 于树云;宋诗铎;;万古霉素联合盐酸氨溴索对表葡菌生物膜干预作用的实验研究[A];中华医学会呼吸病学年会——2011（第十二次全国呼吸病学学术会议）论文汇编[C];2011年

8 唐梦丹;郑建锋;赵敬军;;曲霉生物膜研究进展[A];2012全国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2012年

9 李剑锋;张红东;邱枫;杨玉良;;离散变分原则在生物膜形变模拟中的应用[A];2013年全国高分子学术论文报告会论文摘要集——主题B：高分子理论、计算与模拟[C];2013年

10 叶树集;马素兰;李红春;;生物膜上胆固醇传输动力学的非线性光谱研究[A];中国化学会第十四届胶体与界面化学会议论文摘要集-第1分会：表面界面与纳米结构材料[C];2013年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 记者 孙琪;顶级专家聚蓉 研讨防治“生物膜”[N];四川日报;2011年

2 记者 盛利;细菌生物膜研究将有效破解细菌抗药性[N];科技日报;2011年

3 本报记者 常丽君;掌控细胞悄悄话 攻破细菌生物膜[N];科技日报;2012年

4 常丽君;新系统能将生物膜改造成生物材料工厂[N];科技日报;2014年

5 实习生 操秀英;科学家发明细菌膜检测新设备[N];科技日报;2007年

6 田建军;生物膜为污水处理提供新模式[N];经济参考报;2004年

7 辽君;生物膜让“老慢支”久治不愈[N];卫生与生活报;2003年

8 本报记者 李颖;生物膜+微孔曝气 净化水体初战告捷[N];中国花卉报;2006年

9 中国水产科学研究院;海水工厂化养殖循环水净化系统中生物膜快速构建方法[N];中国渔业报;2013年

10 唐伟;生物膜研究领域的新收获[N];科技日报;2006年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 孙静;表面附着、休眠对白色念珠菌生物膜滞留菌形成的影响及滞留菌相关基因的初步筛选[D];山东大学;2015年

2 李培谦;黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cucuifimViiiw)生物膜的形成及相关基因功能分析[D];广西大学;2015年

3 陈颖;肺癌生物材料植入白色念珠菌—表皮葡萄球菌生物膜的形成与宿主免疫功能的关系[D];昆明医科大学;2015年

4 史惠卿;亚-MIC头孢他啶、头孢哌酮对大肠埃希菌生物膜形成的影响及机制研究[D];第三军医大学;2013年

5 王小燕;气管导管材料表面细菌与真菌混合生物膜形成及真菌密度感应分子对混合生物膜的作用研究[D];昆明医科大学;2015年

6 王培培;生防枯草芽胞杆菌NCD-2ko株丰产素合成和生物膜形成相关基因的功能分析[D];河北农业大学;2015年

7 陆笑;LuxS/AI-2密度感应信号影响草绿色链球菌生物膜致病力的研究[D];南方医科大学;2015年

8 祝泽兵;供水管网中的耐氯菌群及其耐氯机制研究[D];哈尔滨工业大学;2015年

9 徐志辉;解淀粉芽孢杆菌SQR9生物膜形成和根际定殖分子机理研究[D];南京农业大学;2014年

10 梁伊丽;奥奈达希瓦氏菌气液界面生物膜的生长及其机制研究[D];中南大学;2009年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 闫颖娟;基于生物膜形成的乳酸菌连续接种工艺研究[D];南京农业大学;2010年

2 王薇;管道特征对实际供水管网生物膜微生物种群多样性的影响研究[D];浙江大学;2015年

3 杨安逸;沼气搅拌式固定床的工艺及其生物膜特性[D];黑龙江八一农垦大学;2015年

4 王娟;抗生素锁技术治疗中心静脉导管相关感染的实验室研究[D];长江大学;2015年

5 尼逸伦;池塘生物膜低碳养殖新模式应用研究[D];集美大学;2015年

6 尹正国;脱管散体外抗铜绿假单胞菌生物膜作用的研究[D];甘肃中医药大学(原名：甘肃中医学院);2015年

7 董丽红;棉花根系分泌物对枯草芽胞杆菌NCD-2菌株生物膜形成的影响[D];河北农业大学;2015年

8 谢冰涵;低温对MFC产电性能及阳极生物膜群落结构影响的研究[D];哈尔滨工业大学;2015年

9 翟振;LEA蛋白特征重复片段对POPE生物膜的干燥保护活性研究[D];上海理工大学;2015年

10 戴行楠;污垢对城市原生污水换热的影响[D];中国矿业大学;2015年

  本文关键词：食源性克罗诺杆菌（Cronobacter spp.）生物膜的抑制及毒力差异关键因子发掘，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：278999