不同pH值酸性氧化电位水对多重耐药菌及生物被膜杀灭作用的应用研究

发布时间：2017-04-02 16:05

  本文关键词：不同pH值酸性氧化电位水对多重耐药菌及生物被膜杀灭作用的应用研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:1、观察不同pH值EOW对临床分离的MRSA与MDR-PA的杀灭效果。2、以硅胶膜为载体,建立体外细菌生物被膜模型,明确体外生物被膜形成时间。3、观察不同pH值EOW对临床分离的MDR-PA与MRSA生物被膜杀灭效果。方法:1、收集临床分离的MDR-PA和MRSA各十株,制备合适浓度的菌悬液备用。根据不同pH值,将EOW分为三组,pH3.0、pH在4.0-5.0之间和pH在6.0-7.0之间,对照组为苯扎溴铵组和生理盐水组。将制备好的菌悬液加入到以上不同的处理组,采用悬液杀菌实验,监测不同pH值EOW作用1 min、3 min和5 min对MDR-PA和MRSA的杀灭效果。通过活菌计数,比较各组杀菌率。2、建立生物被膜体外模型,将临床收集的MDR-PA和MRSA制成合适浓度的菌悬液备用。将硅胶膜进行高压蒸汽灭菌放入到24孔板中,加入菌悬液和培养液,培养1 d和3 d,用银染法和扫描电镜观察被膜形成情况。3、将制备好的生物被膜片加入到三组不同pH值的EOW中,分别作用5 min、10 min、20 min后,观察不同pH值EOW对MDR-PA和MRSA生物被膜的杀菌效果。用平板计数法进行活菌计数,计算杀菌率;并用扫描电镜观察作用前后各组被膜形态的变化;荧光显微镜观察作用前后被膜表面死菌量的变化,评估杀菌效果。结果:1、通过悬液杀菌实验,三组不同pH值EOW作用1 min,对MDR-PA的杀菌率分别为98.51%、99.53%、99.74%,作用3 min和5 min,杀菌率均达100%,三组差异无统计学意义(P0.05)。而苯扎溴铵组对MDR-PA作用1 min、3 min、5 min杀菌率分别为,48.71%、70.75%、84.51%,与三组EOW组差异明显,有统计学意义(P0.05);三组不同pH值EOW和苯扎溴铵对MRSA作用1 min、3 min、5 min杀菌率均为100%,差异无统计学意义(P0.05)。2、培养1 d,银染法发现载体表面有散在的黑色斑点,扫描电镜显示硅胶膜表面有散在的菌落聚集,表明生物被膜未形成;培养3 d,银染法发现载体表面有片状黑色絮状物形成,扫描电镜显示载体表面已经形成片状的菌落聚集,表明生物被膜已经形成。3、生物被膜杀菌结果显示,三组不同pH值EOW对MDR-PA生物被膜,作用5 min和10 min杀菌率均达99%以上,作用20 min均达100%,差异均无统计学意义(P0.05);对MRSA生物被膜作用5 min杀菌率均达99%以上,作用10 min和20min杀菌率均达99.99%以上,差异均无统计学意义(P0.05)。4、扫描电镜在作用不同时间观察被膜形态变化,作用5min,细菌开始变皱,形态发生轻微变化,作用10 min,细菌皱折明显,个别细菌破裂,作用20 min发现大量细菌破裂。荧光染色结果显示,与对照组相比,作用5 min、10 min、20 min,死菌数量明显增多,且差异不明显,这与活菌计数一致。结论:1、三组不同pH值EOW对MDR-PA杀菌效果相同且均优于苯扎溴铵,对MRSA的杀菌效果与苯扎溴铵相同,但苯扎溴铵杀菌谱窄,推荐使用EOW。2、以硅胶膜为载体,培养3 d可以形成细菌生物被膜。3、三组不同pH值EOW对MDR-PA和MRSA生物被膜杀菌效果一致,而偏中性氧化电位水,无腐蚀性且能稳定有效氯,保证杀菌效果,推荐将NEW用于临床耐药菌感染或已形成生物被膜的创面、伤口等。
【关键词】：pH 酸性氧化电位水 多重耐药菌 细菌生物被膜 杀灭作用
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R187
【目录】：

• 缩略语表6-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 文献回顾14-25
• 1 酸性氧化电位水的分类与制备14-15
• 2 酸性氧化电位水的杀菌机制15-16
• 3 酸性氧化电位水的应用范围16-21
• 4 酸性氧化电位水的优缺点21-23
• 5 偏中性氧化电位水的现状23-24
• 6 不同pH值酸性氧化电位水的展望24-25
• 实验一 不同pH值酸性氧化电位水对多重耐药菌体外灭菌活性的分析25-37
• 1 材料25-26
• 1.1 实验菌株25-26
• 1.2 主要仪器26
• 1.3 主要试剂26
• 2 方法26-30
• 2.1 实验分组26
• 2.2 酸性氧化电位水的制备26-27
• 2.3 菌悬液的制备27
• 2.4 中和剂实验27-29
• 2.5 悬液杀菌实验29-30
• 2.6 观察指标30
• 2.7 统计分析30
• 3 结果30-33
• 3.1 不同pH值酸性氧化电位水的理化性质30
• 3.2 杀菌试验结果30-33
• 4 讨论33-37
• 4.1 不同pH值酸性氧化电位水理化性质的比较34
• 4.2 不同pH值酸性氧化电位水对多重耐药菌的杀灭作用34-35
• 4.3 苯扎溴铵的临床应用与局限性35
• 4.4 不同pH值酸性氧化电位水的临床应用35-36
• 4.5 展望36-37
• 实验二 多重耐药菌体外生物被膜模型的建立37-43
• 1 材料37-38
• 1.1 实验菌株37
• 1.2 主要仪器37
• 1.3 主要试剂37-38
• 2 方法38-39
• 2.1 制备菌悬液38
• 2.2 体外生物被膜模型的建立38
• 2.3 银染法观察被膜形成情况38
• 2.4 扫描电镜观察被膜形态38-39
• 3 结果39
• 3.1 银染法鉴定39
• 3.2 扫描电镜观察被膜形成情况39
• 4 讨论39-43
• 4.1 体外生物被膜的培养时间40
• 4.2 体外生物被膜载体的选择40
• 4.3 生物被膜的危害40-41
• 4.4 生物被膜的防治措施41-43
• 实验三 不同pH值酸性氧化电位水对多重耐药菌的生物被膜体外灭菌活性的分析43-53
• 1 材料43-44
• 1.1 实验菌株43
• 1.2 主要仪器43-44
• 1.3 主要试剂44
• 2 方法44-46
• 2.1 实验分组44
• 2.2 酸性氧化电位水的制备44
• 2.3 体外生物被膜的建立44-45
• 2.4 银染法鉴定45
• 2.5 平板法菌落计数45
• 2.6 扫描电镜观察生物被膜形态45
• 2.7 荧光显微镜观察45
• 2.8 统计分析45-46
• 3 结果46-50
• 3.1 不同pH值酸性氧化电位水的理化性质46
• 3.2 银染法对生物被膜进行鉴定46
• 3.3 杀菌试验结果46-49
• 3.4 扫描电子显微镜观察生物被膜形态49
• 3.5 荧光显微镜观察结果49-50
• 3.5.1 多重耐药铜绿假单胞菌生物被膜49-50
• 3.5.2 MRSA生物被膜50
• 4 讨论50-53
• 4.1 生物被膜耐药机制51
• 4.2 不同pH的酸性氧化电位水对多重耐药菌生物被膜的杀灭作用51-52
• 4.3 酸性氧化电位水对生物被膜的杀菌机制52
• 4.4 酸性氧化电位水在生物被膜感染中的应用52-53
• 小结53-55
• 参考文献55-63
• 个人简历和研究成果63-64
• 致谢64-65

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