miR-96靶向FOXO3a在纳米级炭黑致16HBE细胞毒性中的作用研究
发布时间：2020-10-12 23:33
目的:本研究旨在探讨纳米级炭黑诱导16HBE细胞毒性作用以及miR-96靶向FOXO3a在其中的作用研究。方法:16HBE(中国典型培养物保藏中心)于含10%热灭活胎牛血清的MEM培养基37℃,5%CO2饱和湿度下培养。选择对数生长期的细胞,用纳米级炭黑处理24小时,剂量分别为0、50、100和200μg/mL;以MEM为阴性对照。采用RT-qPCR法检测16HBE细胞miR-96水平,流式细胞仪检测活性氧水平,AnnexinV-FITC和PI染色并用流式细胞仪检测细胞凋亡,单细胞凝胶电泳(SCGE)测定DNA损伤以及Western Blot方法测定FOXO3a蛋白含量。设计特异的mi R-96抑制序列(miR-96 Inhibitor)和miR-96模拟序列(miR-96 Mimic),脂质体转染,构建miR-96高表达和低表达16HBE细胞。结果:纳米级炭黑处理16HBE细胞后,部分细胞贴壁不牢,折光率差;各剂量组细胞miR-96水平较炭黑处理前明显降低而ROS水平、OTM值、凋亡率显著升高;炭黑处理后FOXO3a蛋白含量是处理前的1.6倍。瞬时转染Mimic组miR-96水平是转染NC Mimic组的7.01倍,转染Inhibitor组mi R-96水平是转染NC Inhibitor组的0.47倍,说明miR-96高低表达细胞株构建成功。炭黑诱导NC Mimic组、Mimic组、NC Inhibitor和Inhibitor组ROS水平、OTM值、早期凋亡率、晚期凋亡率和FOXO3a蛋白含量显著升高,存活率显著降低。炭黑处理后Mimic组ROS水平、OTM值、早期凋亡率、晚期凋亡率、存活率和FOXO3a蛋白含量分别为炭黑处理后NC Mimic组的0.78倍、0.51倍、0.70倍、0.49倍、1.05倍、0.67倍,即炭黑处理后Mimic组各指标升高的幅度低于炭黑处理后NC Mimic组。炭黑处理后Inhibitor组ROS水平、OTM值、早期凋亡率、晚期凋亡率、存活率和FOXO3a蛋白含量分别为炭黑处理后NC Inhibitor组的1.57倍、2.84倍、1.99倍、1.63倍、0.89倍、1.72倍,即炭黑处理后Inhibitor组各指标升高的幅度高于炭黑处理后NC Inhibitor组。结论:纳米级炭黑诱导16HBE细胞产生氧化损伤,DNA损伤和细胞凋亡。纳米级炭黑可以抑制miR-96的表达;mi R-96 Mimic可以减轻纳米级炭黑诱导的16HBE细胞氧化损伤,DNA损伤和细胞凋亡;miR-96Inhibitor促进纳米级炭黑诱导的16HBE细胞氧化损伤、DNA损伤和细胞凋亡。纳米级炭黑诱导16HBE细胞FOXO3a蛋白表达增加,其机制可能与炭黑对miR-96的抑制作用有关。
【学位单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R114
【部分图文】：
图 1 纳米级炭黑染毒后 16HBE 细胞显微镜形态变化A/B：100×； C/D：200×。A/C：0μg/ml CB；B/D：100μg/ml CB。Fig.1 The morphology changes induced by CB in 16HBE cells.A/B: 100×;C/D; 200×.A/C: 0μg/ml CB; B/D: 100μg/ml CB
20 纳米级炭黑诱导 16HBE 细胞 DNA 损伤的彗星实验图(EB 200μg/ml CB；B：50μg/ml CB；C：100μg/ml CB；D：200μg/mFig.2 The images of DNAdamages induced by CB in 16HBEells (EB 200×).A: 0μg/ml CB; B: 50μg/ml CB; C: 100μg/ml CB; D200μg/ml CB
图 3 纳米级炭黑对 16HBE 细胞凋亡的影响的流式检测图A：0μg/ml CB；B：100μg/ml CB。Fig.3 The images of flow cytometry of 16HBE cellsApoptosisinduced by CB.A: 0μg/ml CB ; B: 100μg/ml CB.A
【参考文献】
本文编号：2838435
【学位单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R114
【部分图文】：
图 1 纳米级炭黑染毒后 16HBE 细胞显微镜形态变化A/B：100×； C/D：200×。A/C：0μg/ml CB；B/D：100μg/ml CB。Fig.1 The morphology changes induced by CB in 16HBE cells.A/B: 100×;C/D; 200×.A/C: 0μg/ml CB; B/D: 100μg/ml CB
20 纳米级炭黑诱导 16HBE 细胞 DNA 损伤的彗星实验图(EB 200μg/ml CB；B：50μg/ml CB；C：100μg/ml CB；D：200μg/mFig.2 The images of DNAdamages induced by CB in 16HBEells (EB 200×).A: 0μg/ml CB; B: 50μg/ml CB; C: 100μg/ml CB; D200μg/ml CB
图 3 纳米级炭黑对 16HBE 细胞凋亡的影响的流式检测图A：0μg/ml CB；B：100μg/ml CB。Fig.3 The images of flow cytometry of 16HBE cellsApoptosisinduced by CB.A: 0μg/ml CB ; B: 100μg/ml CB.A
【参考文献】
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本文编号：2838435
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