诺龙化学发光免疫分析方法的研究

发布时间：2017-04-03 20:17

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【摘要】：本论文建立了诺龙化学发光免疫分析方法,并能同时检测群勃龙、丙酸诺龙、雄诺龙、美雄诺龙其他四种蛋白同化激素。 在诺龙多克隆抗体制备基础上,对化学发光免疫分析中的主要参数进行了优化,即抗体包被量、酶标抗原的浓度、样品稀释液以及发光底物的种类及浓度。建立了诺龙化学发光酶联免疫分析方法,并对方法的性能指标进行了系统评价。该方法能同时检测诺龙、群勃龙、丙酸诺龙、雄诺龙、美雄诺龙五种蛋白同化激素,且具有很高的灵敏度,其中诺龙IC50=0.050μg/L, IC15=0.00378μg/L、群勃龙IC50=0.094μg/L, IC15=0.00330μg/L、丙酸诺龙IC50=0.66μg/L,IC15=0.259μg/L、雄诺龙IC50=1.40μg/L, IC15=0.0398μg/L、美雄诺龙IC50=2.40μg/L, IC15=0.078μg/L,与传统酶联免疫吸附分析方法相比,灵敏度提高了5-8倍,该检测方法的变异系数在20%以下。 选取了猪肉、鸡肉和牛肉作为检测样品,通过甲醇提取,磷酸盐缓冲液稀释,即可消除样品的基质影响。实际样品中诺龙的平均回收率为83.2%-94.2%,表明方法的准确性。同时与传统酶联免疫吸附测定方法的检测结果比较,相关系数R2=0.9988；进一步利用高效液相色谱法对建立的诺龙化学发光酶免疫分析方法的准确性进行了验证,两种方法检测结果的线性相关系数R2值0.9816,研究结果说明所建立的诺龙化学发光酶免疫分析方法的准确性,能用于动物源性食品中诺龙类物质的快速检测。
【关键词】：诺龙 蛋白同化激素 化学发光 酶联免疫分析
【学位授予单位】：天津科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R155.5
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-8
• 1 前言8-22
• 1.1 研究背景8-12
• 1.1.1 兽药残留的概况10-11
• 1.1.2 兽药残留的危害11-12
• 1.2 蛋白同化激素概述12-17
• 1.2.1 蛋白同化激素简介12-13
• 1.2.2 蛋白同化激素对人的影响13-14
• 1.2.3 蛋白同化激素的限量14
• 1.2.4 蛋白同化激素检测方法研究进展14-17
• 1.3 化学发光免疫分析方法简介17-20
• 1.3.1 化学发光法的基本原理17
• 1.3.2 常用的化学发光剂17-18
• 1.3.3 化学发光免疫分析方法的类型18-20
• 1.3.4 化学发光免疫分析方法的发展进程20
• 1.4 论文研究目的和意义20
• 1.5 论文研究内容20-22
• 2 材料与方法22-34
• 2.1 实验材料22-25
• 2.1.1 主要药品22-23
• 2.1.2 主要仪器设备23-24
• 2.1.3 常用溶液的配制24-25
• 2.1.4 实验样品25
• 2.2 实验方法25-34
• 2.2.1 诺龙抗体纯化和酶标半抗原的制备25-27
• 2.2.2 建立直接竞争化学发光酶联免疫法(dc-CLEIA)的方法27-29
• 2.2.3 dc-CLEIA检测方法的特异性29-30
• 2.2.4 样品基质影响消除30
• 2.2.5 dc-CLEIA各项性能指标的评价30-31
• 2.2.6 诺龙dc-CLEIA和直接竞争ELISA的性能比较31-34
• 3 结果与讨论34-56
• 3.1 诺龙抗体纯化和酶标抗原的制备34-35
• 3.1.1 诺龙抗体纯化34
• 3.1.2 诺龙半抗原的合成及表征34-35
• 3.1.3 诺龙酶标抗原制备35
• 3.2 诺龙直接竞争化学发光酶联免疫法的建立35-41
• 3.2.1 化学发光底物和储存条件的选择35-36
• 3.2.2 dc-CLEIA试剂工作浓度的确定36-38
• 3.3.3 反应体系各影响因素的优化38-41
• 3.3 dc-CLEIA检测方法的特异性41-43
• 3.4 样品的基质影响及消除43-47
• 3.5 直接竞争化学发光酶联免疫法的方法学评价47-50
• 3.5.1 方法的检出限和灵敏度47
• 3.5.2 方法的精密度47-49
• 3.5.3 方法的准确度49-50
• 3.6 抗体和酶标抗原的稳定性结果50-51
• 3.6.1 抗体稳定性50
• 3.6.2 酶标抗原稳定性50-51
• 3.7 诺龙dc-CLEIA和直接竞争ELISA的性能比较51-54
• 3.7.1 直接竞争ELISA标准曲线51-52
• 3.7.2 诺龙dc-CLEIA与直接竞争ELISA的一致性52-54
• 3.8 诺龙dc-CLEIA的HPLC方法验证54-56
• 3.8.1 诺龙HPLC检测方法54
• 3.8.2 dc-CLEIA和HPLC两种方法检测结果的相关性分析54-56
• 4 结论56-57
• 5 展望57-58
• 6 参考文献58-64
• 7 攻读硕士学位期间发表论文情况64-65
• 8 致谢65

【参考文献】

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本文编号：284927