孕哺期壬基酚暴露经由内质网应激致仔鼠海马神经元凋亡的机制研究

发布时间：2020-10-28 13:43

　　 目的:壬基酚(Nonylphenol,NP)是一种持久性有机污染物(Persistent Organic Pollutants,POPs),它被广泛应用于工农业产品中。进入环境中的NP难降解,易蓄积于生物体内。人们在日常生活中可通过饮水和饮食等途径暴露于NP,造成内分泌、免疫、生殖、神经等系统损伤,孕哺期是神经系统发育的关键时期,对外部因素的刺激更加敏感,胎儿在此时期暴露于NP可引起子代学习记忆功能的损伤。海马是学习记忆的关键脑区,海马神经元的异常凋亡会影响学习记忆。而持续的内质网应激可引起细胞凋亡。PERK/ATF4/CHOP和Calpain2/Cleaved Caspase-12通路与内质网应激介导凋亡密切相关。本研究通过建立孕哺期NP暴露模型,探讨孕哺期母体NP暴露后,子代大鼠海马神经元的凋亡和内质网应激发生情况及其相关机制。研究方法:本研究对怀孕母鼠进行NP灌胃染毒,建立孕哺期母体NP暴露模型。在第21天对子代海马进行尼氏染色实验;TUNEL实验;Western blot和免疫荧光实验测定凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase-3和内质网应激相关蛋白GRP78的表达水平,Western blot法检测PERK/ATF4/CHOP通路和Calpain2/Cleaved Caspase-12通路中各蛋白的表达水平。结果:1.孕哺期NP暴露使仔鼠海马存活神经元数量减少:仔鼠海马CA1区和CA3区的神经元计数结果显示,与对照组相比,NP暴露组中平均存活神经元数量显著减少,差异有统计学意义(P0.05)。2.孕哺期NP暴露使仔鼠海马神经元凋亡水平升高:在仔鼠海马中的CA1和CA3区,NP暴露组中的TUNEL阳性细胞数显著高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。3.孕哺期NP暴露使仔鼠海马区Cleaved Caspase-3蛋白表达水平升高:Western blot结果显示,在仔鼠海马中,与对照组相比,NP暴露组中Cleaved Caspase-3蛋白的表达水平均升高,差异具有统计学意义(P0.05)。免疫荧光结果显示,仔鼠海马CA1和CA3区中,NP暴露组中的Cleaved Caspase-3表达水平显著高于对照组。4.孕哺期NP暴露使仔鼠海马神经元GRP78蛋白表达水平升高:Western blot结果显示,在仔鼠海马中,NP暴露组神经元中GRP78水平高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。免疫荧光结果显示,仔鼠海马CA1和CA3区中,NP暴露组神经元中的GRP78表达水平显著高于对照组。5.孕哺期NP暴露使仔鼠海马PERK/ATF4/CHOP通路激活:与对照组相比,NP暴露组中p-PERK,PERK,ATF4,CHOP蛋白的表达显著增加,且差异有统计学意义(P0.05)6.孕哺期NP暴露使仔鼠海马Calpain2/Cleaved Caspase-12通路激活:在仔鼠海马中,NP暴露组与对照组相比Cailpain2表达量显著增加,差异有统计学意义(P0.05)。NP暴露组的Cleaved Caspase-12蛋白表达的水平高于对照组,有统计学意义(P0.05)。结论:1.孕哺期NP暴露导致子代大鼠海马神经元凋亡增加。2.孕哺期NP暴露导致子代大鼠海马神经元发生内质网应激。3.孕哺期NP暴露导致子代大鼠海马神经元凋亡可能与内质网应激有关。
【学位单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R114
【部分图文】：

NP各剂量组仔鼠海马神经元CA1、CA3区尼氏染色结果（*表示与对照组相比，P<

13图 4. 仔鼠海马 CA1、CA3 区 Cleaved Caspase-3 蛋白的免疫荧光检测结果（x 200）图中 MAP2（绿色）是神经树突骨架蛋白（作为神经元标记）。

NP各剂量组仔鼠海马p-PERK、PERK、ATF4、CHOP蛋白的表达情况（*表示与对照组相比，P<0.05）
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本文编号：2860166