玉米面及其相关样品中唐菖蒲伯克霍尔德氏菌的检测、鉴定及序列分析研究

发布时间：2020-11-06 06:17

　　 唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(Burkholderia gladioli)一种广泛存在的细菌,其中部分菌株产米酵菌酸和毒黄素。我国在上世纪70-80年代椰毒假单胞菌(曾用名)食物中毒较为普遍和严重时期对该菌的报道和研究较多,之后相关研究鲜见,但至今无法杜绝该类细菌食物中毒事件的发生且死亡率居高不下。采用现代手段对该菌进行深入研究具有理论和实际价值。本研究以酵米面食物中毒事件高发地区—云南省文山州和红河州所采土样、黄白玉米面以及吊浆粑为主要研究材料,运用GB/T 4789.29─2003《食品卫生微生物学检验椰毒假单胞菌酵米面亚种检验》改良的分离方法对研究材料进行分离,以食品及环境样品中初步分离的13株疑似唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(Burkholderia gladioli)为研究对象,通过比较生理生化检测法、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)法和recA序列分析法,得到快速准确鉴定唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(B.gladioli)的方法。结果表明,13株疑似菌株经MALDI-TOF-MS法和recA序列分析法鉴定为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(B.gladioli),而VITEK 2 COMPACT生理生化法鉴定8株(62%)为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌,其他5株为栖稻假单胞菌(Pseudomonas oryzihabitans)。在B.gladioli的鉴定方法中,MALDI-TOF-MS法和recA序列分析法鉴定结果一致且准确,而VITEK 2 COMPACT生化检测法存在缺陷。相比传统生理生化鉴定方法,MALDI-TOF-MS法和recA序列分析法在唐菖蒲伯克霍尔德氏菌鉴定中更为快速、准确。本研究采用近几年发展较快的分型方法多位点序列分型(MLST)对分离株进行分型,来自本实验室13株分离株的6对管家基因的alleles被检测出来,其中gyrB突变率最高,13株菌种有5株菌有新的alleles,突变率达到38.5%,而atpD与gltB相对比较保守,未发现新的管家基因型。经过6对基因的多基因联合建树,证明6对管家基因能够将伯克霍尔德氏属中的致病菌株与环境分离株区分开来。本实验采用小鼠毒性试验、液相色谱-质谱联用快速检测技术对米酵菌酸进行测定。采用分光光度法对毒黄素进行粗测。菌株中两种毒素的产量与菌株的来源无关,但可以看出分离株均有较强的产毒能力。实验对食物中毒案例中分离得到的B.gladioliYD-2和B.gladioliCICC10574进行生长曲线的测定,这两种菌株的生长情况很类似,在37℃培养时,菌株于pH5.05时生长最为旺盛,而在pH为4和pH为7时,菌株生长十分缓慢。在12~32h进入对数期。
【学位单位】：武汉轻工大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R155.5
【部分图文】：

米酵菌酸结构式Fig1-1BongkrekicAcidStructure

毒黄素结构式Fig1-2ToxoflavinStructure

不同种类样品中唐菖蒲伯克霍尔德氏菌检出率比较
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本文编号：2872763