茶多酚对三邻甲苯基磷酸酯诱导小鼠卵巢颗粒细胞损伤的保护作用及机制研究

发布时间：2020-11-15 03:30

　　 目的:三邻甲苯基磷酸酯(Tri-ortho-cresyl phosphate,TOCP)在工业及日常生活上应用广泛,TOCP对女性生殖系统有一定的损伤,但其作用机制尚不清楚。本文拟研究TOCP对小鼠卵巢和卵巢颗粒细胞的损伤及其可能机制,并初步探讨茶多酚(Tea polyphenols,TP)对TOCP诱导的小鼠卵巢和卵巢颗粒细胞损伤是否具有保护作用及其可能机制。方法:用Western blot检测TOCP及TP干预后TOCP对小鼠卵巢组织及卵巢颗粒细胞自噬的影响;用活性氧检测试剂盒检测TOCP及TP干预后TOCP对小鼠卵巢组织及卵巢颗粒细胞氧化应激的影响;用MTT法检测TOCP及TP干预后TOCP对小鼠卵巢颗粒细胞活性的影响;用透射电子显微镜(Transmission electron microscopy,TEM)检测TOCP及TP干预后TOCP对小鼠卵巢颗粒细胞自噬的影响。结果:用不同剂量的TOCP(0,100,200,400 mg/kg)给小鼠连续灌胃14天,结果显示,TOCP可显著增加小鼠卵巢组织中自噬蛋白LC3-II/LC3-I的比例以及Beclin1和Atg5表达量,表明TOCP可诱导小鼠卵巢组织自噬。同时,TOCP还可增加小鼠卵巢组织中MDA含量,降低GSH含量以及SOD和GSH-PX活性,表明TOCP可诱导小鼠卵巢组织产生氧化应激。而TP预处理可抑制TOCP对小鼠卵巢组织氧化应激和自噬的诱导。提示TP可通过抑制小鼠卵巢组织产生氧化应激,从而抑制小鼠卵巢组织自噬。用不同浓度TOCP(0,0.125,0.25,0.5 mM)处理原代培养的小鼠卵巢颗粒细胞48小时,MTT结果显示,TOCP呈浓度依赖式地抑制小鼠卵巢颗粒细胞活性(P0.05);同时TOCP可显著增加体外培养的小鼠卵巢颗粒细胞中自噬蛋白LC3-II/LC3-I的比例以及Beclin1和Atg5表达量,表明TOCP可诱导小鼠卵巢颗粒细胞自噬。TOCP可显著增加小鼠卵巢颗粒细胞中MDA含量,降低GSH含量以及SOD和GSH-PX活性,表明TOCP可诱导小鼠卵巢颗粒细胞产生氧化应激。而TP预处理可挽救TOCP对小鼠卵巢颗粒细胞活性的抑制(P0.05);同时,TP预处理还可显著抑制TOCP对小鼠卵巢颗粒细胞氧化应激。Western blot结果显示,TP预处理可降低TOCP处理组中的LC3-II/LC3-I的比例以及Beclin1和Atg5表达量;TEM结果显示,TOCP处理组的细胞中均出现大量的自噬泡,而TP预处理后可显著减少TOCP处理组中细胞的自噬泡数量。提示TP可通过抑制细胞产生氧化应激,从而抑制TOCP诱导的小鼠卵巢颗粒细胞自噬。结论:TOCP可通过诱导小鼠卵巢组织及其颗粒细胞产生氧化应激而导致自噬并造成损伤;TP可通过抑制TOCP诱导的卵巢组织及其颗粒细胞产生氧化应激而抑制细胞自噬的发生,并对TOCP引起卵巢及其颗粒细胞的损伤起保护作用。
【学位单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R114
【部分图文】：

用不同剂量的 TOCP（0, 100, 200, 400 mg/kg）给小鼠连续灌胃给药 14 d 后，用 Western Blot 检测卵巢组织内 LC3、Atg5 和 Beclin1 的表达。实验结果发现，TOCP 可使小鼠卵巢组织内 LC3-II/LC3-I 的比例以及 Atg5 和 Beclin1 的表达量显著增加（图 1），提示 TOCP 可诱导小鼠卵巢组织自噬。

第 3 章 结果制 GSH 含量；并且 TOCP 还显著抑制小鼠卵巢组织内 GSH-PX 的活性（图 2），提示 TOCP 可诱导小鼠卵巢组织产生氧化应激。

图 3 TP 抑制 TOCP 诱导的小鼠卵巢组织氧化应激Fig.3. TP inhibits TOCP-induced oxidative stress in mouse ovarian tissue. Ovaries wereobtained from the mice treated with 0, 400 mg/kg/day TOCP and 400 mg/kg/day TOCP plus 100mg/kg/day for 14 days. Then the contents of MDA (A) and GSH (B) and the activities of SOD (C)and GSH-PX (D) were determined. Data were analyzed by one-way ANOVA. n=8, *P< 0.05 vsthe control group,＃P< 0.05 vs the TOCP-treated group.3.4 TP 抑制 TOCP 诱导的小鼠卵巢组织自噬用 0, 400 mg/kg TOCP 及 400 mg/kg TOCP+100 mg/kg TP 给小鼠连续灌胃给药 14 d 后，用 Western Blot 检测卵巢组织内 LC3、Atg5 和 Beclin1 的表达，实验结果发现，与 TOCP 处理组相比，TP 预处理可使小鼠卵巢组织内 LC3-II/LC3-I的比例以及 Atg5 和 Beclin1 的表达量显著降低（图 4），提示 TP 可抑制 TOCP诱导的小鼠卵巢组织自噬。
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本文编号：2884288