PI3K/Akt信号通路在锰致PC12细胞毒性中的作用研究
发布时间：2020-12-04 06:35
目的通过体外PC12细胞实验,探讨锰染毒对神经细胞PI3K/Akt信号通路的影响及该信号通路在锰致神经细胞氧化应激、凋亡过程中的作用。02575125μM Mn SOPC12方法采用0,25,75,125μM硫酸锰（Mn SO4）分别对PC12细胞进行染毒24小时后,在倒置相差显微镜下观察细胞形态,应用CCK8法测定其存活率,Annexin V-FITC细胞凋亡试剂盒检测其凋亡率,南京建成试剂盒检测其SOD、GSH-Px、CAT及MDA水平,Western Blot法测定其PI3K/Akt信号通路相关蛋白Akt、Fox O3的相对表达量表达及其磷酸化水平,荧光实时定量PCR法测定其Bcl-2、Bax、Caspase-3 m RNA相对表达水平。此外,采用浓度为50μM的PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002提前处理PC12细胞1小时后Mn SO4染毒,染锰剂量、时间、检测指标同上述染毒实验。结果:（1）随着染锰剂量的增加,PC12细胞内SOD、GSH-Px、CAT活力降低,MDA含量升高。高剂量组SOD、GSH-Px活力分别为（219.308±6.602）U/ml、（189.3...
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
个人简历
英文缩略词
中文摘要
英文摘要
1 前言
2 材料与方法
2.1 主要仪器与试剂
2.1.1 仪器
2.1.2 试剂
2.2 PC12细胞体外实验
2.2.1 PC12细胞培养
2.2.2 PC12细胞锰染毒剂量及时间的选定
2.2.3 CCK-8 法检测PC12细胞存活率
2.2.4 流式细胞术FCM检测PC12细胞凋亡率
2.3 PC12细胞氧化应激水平测定
2.3.1 羟胺法检测PC12细胞内SOD水平
2.3.2 比色法检测PC12细胞内GSH-PX水平
2.3.3 可见光法检测PC12细胞内CAT水平
2.3.4 TBA法检测PC12细胞内MDA水平
2.4 Western Blot实验
2.5 RT-PCR检测PC12细胞凋亡相关基因的mRNA表达
2.6 数据统计分析方法
3 结果
3.1 不同硫酸锰浓度处理对PC12细胞存活率的影响
3.2 不同硫酸锰染毒时间对PC12细胞存活率的影响
3.3 硫酸锰对PC12细胞形态学的影响
3.4 硫酸锰对PC12细胞凋亡率的影响
3.5 硫酸锰对PC12细胞氧化应激的影响
3.6 硫酸锰对PC12细胞PI3K/Akt信号通路的影响
3.6.1 硫酸锰对PC12细胞Akt及其磷酸化蛋白表达量的影响
3.6.2 硫酸锰对PC12细胞Fox O3及其磷酸化蛋白表达量的影响
3.7 硫酸锰对PC12细胞凋亡相关基因表达的影响
3.7.1 硫酸锰对PC12细胞Bcl-2 基因mRNA表达的影响
3.7.2 硫酸锰对PC12细胞Bax基因m RNA表达的影响
3.7.3 硫酸锰对PC12细胞Caspase-3 基因m RNA表达的影响
3.8 PC12细胞PI3K/Akt信号通路相关蛋白相对表达量与氧化应激、凋亡指标的的相关关系
3.9 PI3K/Akt信号通路抑制实验
3.9.1 PI3K/Akt信号通路抑制后锰对PC12细胞凋亡率的影响
3.9.2 PI3K/Akt信号通路抑制后锰对PC12细胞形态学的影响
3.9.3 PI3K/Akt信号通路抑制后锰对PC12细胞氧化应激的影响
3.9.4 PI3K/Akt信号通路抑制后锰对PC12细胞PI3K/Akt信号通路的影响
3.9.4.1 PI3K/Akt信号通路抑制后锰对PC12细胞Akt及其磷酸化蛋白表达量的影响
3.9.4.2 PI3K/Akt信号通路抑制后锰对PC12细胞FoxO3及其磷酸化蛋白表达量的影响
3.9.5 PI3K/Akt信号通路抑制后锰对PC12细胞凋亡相关基因表达的影响
3.9.5.1 PI3K/Akt信号通路抑制后锰对PC12细胞Bcl-2 基因m RNA表达的影响
3.9.5.2 PI3K/Akt信号通路抑制后锰对PC12细胞Bax基因mRNA表达的影响
3.9.5.3 PI3K/Akt信号通路抑制后锰对PC12细胞Caspase-3 基因mRNA表达的影响
4 讨论
4染毒对PC12细胞氧化应激的影响"> 4.1 MnSO4染毒对PC12细胞氧化应激的影响
4染毒对PC12细胞凋亡的影响"> 4.2 MnSO4染毒对PC12细胞凋亡的影响
4染毒对PC12细胞PI3K/Akt信号通路的影响及该信号通路在锰致PC12细胞毒性中的作用"> 4.3 MnSO4染毒对PC12细胞PI3K/Akt信号通路的影响及该信号通路在锰致PC12细胞毒性中的作用
5 结论
5.1 研究结论
5.2 研究的创新点
5.3 研究的不足及展望
参考文献
综述 锰对信号通路的影响
参考文献
致谢
研究生期间发表的论文
本文编号：2897164
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
个人简历
英文缩略词
中文摘要
英文摘要
1 前言
2 材料与方法
2.1 主要仪器与试剂
2.1.1 仪器
2.1.2 试剂
2.2 PC12细胞体外实验
2.2.1 PC12细胞培养
2.2.2 PC12细胞锰染毒剂量及时间的选定
2.2.3 CCK-8 法检测PC12细胞存活率
2.2.4 流式细胞术FCM检测PC12细胞凋亡率
2.3 PC12细胞氧化应激水平测定
2.3.1 羟胺法检测PC12细胞内SOD水平
2.3.2 比色法检测PC12细胞内GSH-PX水平
2.3.3 可见光法检测PC12细胞内CAT水平
2.3.4 TBA法检测PC12细胞内MDA水平
2.4 Western Blot实验
2.5 RT-PCR检测PC12细胞凋亡相关基因的mRNA表达
2.6 数据统计分析方法
3 结果
3.1 不同硫酸锰浓度处理对PC12细胞存活率的影响
3.2 不同硫酸锰染毒时间对PC12细胞存活率的影响
3.3 硫酸锰对PC12细胞形态学的影响
3.4 硫酸锰对PC12细胞凋亡率的影响
3.5 硫酸锰对PC12细胞氧化应激的影响
3.6 硫酸锰对PC12细胞PI3K/Akt信号通路的影响
3.6.1 硫酸锰对PC12细胞Akt及其磷酸化蛋白表达量的影响
3.6.2 硫酸锰对PC12细胞Fox O3及其磷酸化蛋白表达量的影响
3.7 硫酸锰对PC12细胞凋亡相关基因表达的影响
3.7.1 硫酸锰对PC12细胞Bcl-2 基因mRNA表达的影响
3.7.2 硫酸锰对PC12细胞Bax基因m RNA表达的影响
3.7.3 硫酸锰对PC12细胞Caspase-3 基因m RNA表达的影响
3.8 PC12细胞PI3K/Akt信号通路相关蛋白相对表达量与氧化应激、凋亡指标的的相关关系
3.9 PI3K/Akt信号通路抑制实验
3.9.1 PI3K/Akt信号通路抑制后锰对PC12细胞凋亡率的影响
3.9.2 PI3K/Akt信号通路抑制后锰对PC12细胞形态学的影响
3.9.3 PI3K/Akt信号通路抑制后锰对PC12细胞氧化应激的影响
3.9.4 PI3K/Akt信号通路抑制后锰对PC12细胞PI3K/Akt信号通路的影响
3.9.4.1 PI3K/Akt信号通路抑制后锰对PC12细胞Akt及其磷酸化蛋白表达量的影响
3.9.4.2 PI3K/Akt信号通路抑制后锰对PC12细胞FoxO3及其磷酸化蛋白表达量的影响
3.9.5 PI3K/Akt信号通路抑制后锰对PC12细胞凋亡相关基因表达的影响
3.9.5.1 PI3K/Akt信号通路抑制后锰对PC12细胞Bcl-2 基因m RNA表达的影响
3.9.5.2 PI3K/Akt信号通路抑制后锰对PC12细胞Bax基因mRNA表达的影响
3.9.5.3 PI3K/Akt信号通路抑制后锰对PC12细胞Caspase-3 基因mRNA表达的影响
4 讨论
4染毒对PC12细胞氧化应激的影响"> 4.1 MnSO4染毒对PC12细胞氧化应激的影响
4染毒对PC12细胞凋亡的影响"> 4.2 MnSO4染毒对PC12细胞凋亡的影响
4染毒对PC12细胞PI3K/Akt信号通路的影响及该信号通路在锰致PC12细胞毒性中的作用"> 4.3 MnSO4染毒对PC12细胞PI3K/Akt信号通路的影响及该信号通路在锰致PC12细胞毒性中的作用
5 结论
5.1 研究结论
5.2 研究的创新点
5.3 研究的不足及展望
参考文献
综述 锰对信号通路的影响
参考文献
致谢
研究生期间发表的论文
本文编号：2897164
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