TCIPP和TCEP对斑马鱼胚胎/仔鱼神经发育的影响研究

发布时间：2020-12-07 10:25

　　目的:本项目拟以广泛存在于环境介质中的氯代有机磷阻燃剂（TCEP及TCIPP）为研究对象,以斑马鱼为模式生物,探讨TCEP及TCIPP对斑马鱼仔鱼早期神经发育的影响,以揭示TCEP及TCIPP对斑马鱼的神经毒性作用及潜在的分子机制。方法:将斑马鱼胚胎（受精后2小时[hpf]内）暴露于不同浓度的TCEP及TCIPP（0,100,500及2500μg/L）直至120 h,同时选用典型的神经毒性物质毒死蜱（CPF,100μg/L）作为阳性对照。实验过程中对斑马鱼仔鱼72 hpf孵化率、96 h死亡率以及畸形率等生长发育指标进行测定,同时对斑马鱼仔鱼在光暗交替刺激下的自主运动行为、乙酰胆碱含量和乙酰胆碱酯酶活性、中枢神经发育相关的基因（主要包括:α1-tubulin、mbp、syn2α、gfap、shha、ache及gap43）和蛋白等指标进行测定,综合评价TCEP和TCIPP对斑马鱼早期神经发育的影响,并与CPF进行对比研究。结果:我们的结果表明:阳性对照CPF能诱导斑马鱼仔鱼出现典型的发育毒性,主要表现为:与对照组相比,孵化率（81.4±5.62%）和存活率（82.7±4.25%）均显著降... 

【文章来源】：武汉科技大学湖北省

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
主要缩略词
第1章 前言
第2章 材料
    2.1 实验主要试剂
    2.2 实验主要仪器
    2.3 主要溶液的配制
        2.3.1 30%丙烯酰胺
        2.3.2 1.0M Tris-Cl（pH6.8）
        2.3.3 1.5M Tris-CI（pH8.8）
        2.3.4 10%过硫酸氨（10%APS,m/v）
        2.3.5 5×Tris-Gly电泳缓冲液
        2.3.6 BCA工作液
    2.4 斑马鱼
第3章 实验方法
    3.1 斑马鱼的饲养和胚胎暴露
    3.2 斑马鱼仔鱼的运动行为测定
    3.3 斑马鱼仔鱼的神经递质含量测定
    3.4 仔鱼的AChE活性测定
    3.5 中枢神经发育相关基因转录分析
        3.5.1 总RNA的提取
        3.5.2 cDNA合成和荧光定量PCR检测
    3.6 中枢神经发育相关蛋白质提取和 Western blot 实验
        3.6.1 蛋白质的提取与测定
        3.6.2 免疫印迹试验检测与神经发育有关蛋白的表达
    3.7 TCEP和 TCIPP在暴露溶液中的浓度测定
    3.8 统计分析
第4章 实验结果
    4.1 暴露溶液中TCEP和 TCIPP的定量
    4.2 TCEP及 TCIPP处理后斑马鱼仔鱼的发育毒性指标
    4.3 斑马鱼仔鱼的运动行为分析
    4.4 神经递质含量和AchE活性检测
    4.5 与神经发育有关的基因的表达
    4.6 与神经发育有关的蛋白质的表达
第5章 讨论
第6章 结论与展望
致谢
参考文献
综述
    参考文献
附录1 攻读硕士学位期间发表的论文
附录2 攻读硕士学位期间参加的科研项目


【参考文献】：
期刊论文
[1]有机磷酸酯阻燃剂的环境暴露与迁移转化研究进展[J]. 高小中,许宜平,王子健.  生态毒理学报. 2015(02)
[2]东江表层沉积物中的有机磷系阻燃剂[J]. 阮伟,谭晓欣,罗孝俊,麦碧娴.  中国环境科学. 2014(09)
[3]气相色谱/质谱法检测灰尘、土壤和沉积物中有机磷酸酯[J]. 鹿建霞,季雯,马盛韬,于志强,王昭,李寒,任国发,傅家谟.  分析化学. 2014(06)
[4]固相萃取-气相色谱/质谱法测定水中6种有机磷酸酯类阻燃剂和增塑剂[J]. 秦宏兵,范苓,顾海东.  分析科学学报. 2014(02)



本文编号：2903090