生菜污染隐孢子虫卵囊洗脱与巢式PCR检测方法的研究

发布时间：2020-12-17 14:16

　　目的比较生菜表面污染隐孢子虫卵囊的洗脱与检测方法。方法对生菜表面人工"种植"的隐孢子虫卵囊的洗脱次数、振荡方式、振荡频率、振荡时间、洗脱液种类等进行比较,以及3种商业化DNA提取试剂盒提取水溶液中隐孢子虫卵囊DNA的效果进行比较。结果采取往返振荡,振荡频率为100次/min,振荡时间为1 h,洗脱液采用1%Alconox^○R时,其总体回收率最高,达71.40%。不同DNA试剂盒比较显示,土壤DNA提取试剂盒与粪便DNA提取试剂盒较组织DNA提取试剂盒提取水溶液中隐孢子虫卵囊DNA的质与量均高。结论本研究建立了巢式PCR检测生菜表面微小隐孢子虫卵囊的检测方法,为蔬菜的食品安全提供新的技术方法。 

【文章来源】：中国人兽共患病学报. 2020年03期 北大核心

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试验材料
        1.1.1 生菜样品来源
        1.1.2 隐孢子虫卵囊
        1.1.3 洗涤溶液种类
    1.2 卵囊计数及种植方法
    1.3 卵囊的洗脱方法优化
        1.3.1 洗脱次数的比较
        1.3.2 振荡方式的优化
        1.3.3 振荡频率的优化
        1.3.4 振荡时间的优化
        1.3.5 洗涤液的优化
    1.4 洗脱液的回收与卵囊计数
    1.5 洗脱液中卵囊DNA提取的优化
        1.5.1 卵囊DNA的提取
        1.5.2 隐孢子虫特异性基因的扩增
    1.6 统计学分析
2 结 果
    2.1 不同洗脱次数的对比
    2.2 不同振荡方式的比较
    2.3 不同振荡频率的比较
    2.4 不同振荡时间的比较
    2.5 不同洗涤液的比较
    2.6 生菜表面污染隐孢子虫卵囊总体回收率
    2.7 洗脱液中卵囊DNA提取方式的优化
        2.7.1 提取DNA的浓度、纯度和提取率比较
        2.7.2 提取DNA的稳定性
        2.7.3 提取DNA的特异性
        2.7.4 提取DNA的敏感性
3 讨 论


【参考文献】：
期刊论文
[1]微小隐孢子虫卵囊扩增及其纯化方法筛选[J]. 张璐,刘珍珍,王臣荣,张振杰,胡苏辉,王荣军,宁长申,菅复春.  中国病原生物学杂志. 2018(02)
[2]鲜切果蔬中4种病原微生物多重PCR检测技术[J]. 冯可,胡文忠,姜爱丽,萨仁高娃,徐永平,司琦,马新秀.  食品科学. 2018(06)
[3]4种方法提取牛肉干DNA的效果比较[J]. 石盼盼,魏法山,冯波.  食品安全质量检测学报. 2016(07)
[4]自制固相萃取柱-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定果蔬中的8种真菌毒素[J]. 王蒙,姜楠,韦迪哲,冯晓元.  食品科学. 2016(10)
[5]六种试剂盒提取血液基因组DNA效果比较[J]. 张艳,王金鸿,吕亚莉,菅复春,张龙现,宁长申.  中国草食动物科学. 2014(02)



本文编号：2922183