MiR29a/b1在铝致Aβ沉积过程中的体外实验研究

发布时间：2020-12-29 18:39

　　目的:1.探讨麦芽酚铝暴露对大鼠皮质神经元细胞miR-29a、miR-29b1、BACE1和Aβ1-42表达的影响;2.通过建立高表达miR-29a或miR-29b1的细胞模型,进一步探讨miR-29a和miR-29b1在铝致Aβ沉积过程中对BACE1表达的调控机制。3.通过对神经元细胞体外干预实验,探讨NF-κB在铝致miR-29a和miR-29b1异常表达中的作用。方法:1.取新生24 h内的SD大鼠乳鼠的皮质进行原代神经元培养,培养至第三天时加入10μmol/L的阿糖胞苷,应用免疫组化法检测神经元特异性表达蛋白Neuron-specific classⅢβ–Tublin的表达来进行神经元纯度检测。应用不同浓度麦芽酚铝染毒大鼠皮质神经元细胞,剂量分别为空白对照组（0μmol/L）、低剂量组（20μmol/L）、中剂量组（40μmol/L）、高剂量组（80μmol/L）4组,继续培养24 h收集细胞和细胞上液,RT-PCR检测miR-29a、miR-29b1、BACE1 mRNA表达水平,ELISA法检测BACE1蛋白、Aβ1-42含量。2.采用慢病毒感染实验方法将外源性的miR-2... 

【文章来源】：山西医科大学山西省

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

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前言
第一部分 miR-29a/b1在铝致大鼠皮质神经元Aβ沉积中对BACE1表达的调控作用
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 实验方法
        1.3 统计方法
    2 结果
        2.1 大鼠皮质神经元细胞的鉴定及纯度检测
        2.2 大鼠皮质神经元细胞活力及存活率结果
        2.3 不同浓度麦芽酚铝染毒 24h后对大鼠皮质神经元细胞miR-29a和miR-29b1表达的影响
        2.4 不同浓度麦芽酚铝染毒 24h后对大鼠皮质神经元细胞BACE1基因和BACE1蛋白表达的影响
        2.5 不同浓度麦芽酚铝染毒 24h后对大鼠皮质神经元细胞Aβ1-42的影响
        2.6 不同MOI条件下慢病毒感染皮质神经元细胞荧光强度表达情况
        2.7 大鼠皮质神经元细胞转染miR-29a后各指标变化
        2.8 大鼠皮质神经元细胞转染mi R-29b1后各指标变化
    3 讨论
第二部分 miR-29a、miR-29b1在HEK293细胞中对BACE1表达的调控机制
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 实验方法
        1.3 统计方法
    2 结果
        2.1 HEK293细胞体外转染miR-29a和miR-29b1后转染效率检测
        2.2 麦芽酚铝染毒后各组细胞光学下形态
        2.3 各组细胞活力检测结果
        2.4 HEK293细胞不同浓度麦芽酚铝单独染毒后miR-29a和miR-29b1表达变化
        2.5 HEK293细胞转染miR-29a前后各指标变化
        2.6 HEK293细胞转染miR-29b1前后各指标变化
    3 讨论
第三部分 NF-κB在铝致大鼠皮质神经元miR-29a和miR-29b1异常表达中的作用研究
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 实验方法
        1.3 统计方法
    2 结果
        2.1 大鼠皮质神经元干预实验后对各组细胞存活率的影响
        2.2 各组mi R-29a和miR-29b1表达结果
        2.3 各组BACE1基因和BACE1蛋白表达结果
        2.4 各组Aβ1-42表达结果
    3 讨论
结论
参考文献
综述
    参考文献
致谢
在学期间承担/参与的科研课题与研究成果
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]铝对大鼠脑内Aβ蓄积及α-分泌酶各亚型表达变化的影响[J]. 王林平,王静,石樱桃,张玲,牛侨.  毒理学杂志. 2013(05)
[2]微小RNA-29a在卵巢中的调控作用[J]. 李莹,杨晓葵.  中国优生与遗传杂志. 2013(08)
[3]人β-防御素4基因在HEK293细胞中的转染表达[J]. 曹玉红,成胜权,张光运,钱新宏,李如英,丁翠玲.  医学研究生学报. 2012(10)
[4]铝对PC12细胞淀粉样前体蛋白β位点裂解酶-1蛋白及基因表达的影响[J]. 李伟庆,葛翠翠,贾志建,梁瑞峰,牛侨.  环境与职业医学. 2012(04)
[5]麦芽酚铝暴露对大鼠神经行为的影响[J]. 梁瑞峰,李伟庆,牛侨.  环境与健康杂志. 2011(04)
[6]DNA聚合酶iota在HEK-293细胞中高表达体系的建立[J]. 周虎传,杨劲,曾益军,位全芳,何凤田,赵谦,李劲,刘洋,李杰.  现代生物医学进展. 2008(07)
[7]铝电解工神经行为、自主神经功能的改变[J]. 何淑嫦,张爱民,牛侨,王生,陈艺兰.  卫生研究. 2003(03)
[8]电解铝工人神经行为功能的改变及其机理探讨[J]. 郭智勇,朱启星,胡传来,余秋月.  中国公共卫生. 2002(03)
[9]脑内NF-κB及其病理生理学意义[J]. 杨志华.  国外医学(生理、病理科学与临床分册). 2000(06)
[10]铝对人体健康的影响[J]. 董锦平,陈涛,邹公伟,毕树平.  环境监测管理与技术. 1998(05)

博士论文
[1]microRNA-210通过靶向NF-κB1负性调节LPS诱导的炎症反应[D]. 祁建妮.山东大学 2012

硕士论文
[1]hIL-10基因瞬时转染HEK293细胞介导的免疫学效应研究[D]. 马静.吉林大学 2007



本文编号：2946107