CYP2E1酶依赖性遗传毒性实验模型探讨及在多氯联苯诱发基因突变研究中的应用

发布时间：2020-12-31 07:32

　　有机致癌物自身通常缺乏生物反应性,需要经过代谢活化才具有致突变和致癌性。化学物的致突变性筛查通常采用体外细胞遗传毒理学试验,然而,由于常规细胞缺少生物转化酶活性,易致假阴性结果。采用体外代谢活化系统（如大鼠肝脏S9混合物）可增加致突变物的检出率。然而,某些重要的代谢酶在肝细胞中并不表达或者表达量不受常用诱导剂（如Aroclor 1254）影响,导致依赖相应酶活化的前致突变物在添加S9混合物的实验体系中也表现为阴性结果。采用重组表达特定细胞色素P450（cytochrome P450,CYP）酶的细胞系作为遗传毒性研究的实验体系可明显增加前致突变物的检出率。CYP2E1是活化某些亲脂性小分子化合物的重要代谢酶,表达该酶的各种细胞模型已被用于研究相关前致突变物的遗传毒作用,然而关于细胞内表达代谢酶的实验体系与细胞外添加S9混合物的活化体系的比较优势尚未见报道。N-二乙基亚硝胺（NDEA）是重要的食品污染物及肝脏诱癌剂,在缺乏代谢酶活性的实验体系中遗传毒性试验结果为阴性,只有在添加S9混合物并采用高浓度处理才表现致突变作用。有研究提示其可能经CYP2E1酶代谢活化。本研究采用表达人CYP2E... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：103 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１－１?Ｖ７９－Ｍｚ、Ｖ７９衍生细胞和Ｌ－０２细胞系中ＣＹＰ２Ｅ１酶的表达??

ｌｉｖｅｒ?Ｓ９?ｍｉｘ??１．３．５．４?ＤＭＳＯ?对?Ｖ７９－ｈＣＹＰ２Ｅｌ－ｈＳＵＬＴｌＡＩ?细胞?ＣＹＰ２Ｅ１?酶表达量的影响??由图１?－７可知，与阴性对照组相比，ＤＭＳＯ在０．０５％？０．２％的范围内不影响??Ｖ７９－ｈＣＹＰ２Ｅｌ－ｈＳＵＬＴｌＡ丨细胞屮ＣＹＰ２Ｅ１酶表达水、卜，统计学无差异（ｐ?＞?０．０５）。??４３??

分细胞冲付基因发生自发突变；阳性对照组ＮＤＥＡ的平皿中克隆数显著增多，??提示了?ＮＤＥＡ加入后发生基因突变获得６－ＴＧ抗性的细胞数目增加，（见??图２－２Ａ、Ｂ）?，?ＰＣＢ２８和ＰＣＢ５２组的突变克隆图片与阳性对照类似。??Ｄ?ＡＭ??曹??Ａ?Ｃｏｎｔｒｏｌ?Ｂ?ＮＤＥＡ?（２０〇ｎｍｏｌ／Ｌ）??图?２－２?６－ＴＧ?抗性?Ｖ７９－ｈＣＹＰ２Ｅｌ－ｈＳＵＬＴｌＡｌ?突变克隆??Ｆｉｇ．?２－２?６－Ｔｈｉｏｇｕａｎｉｎｅ?（ＴＧ）－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ?Ｖ７９－ｈＣＹＰ２Ｅｌ－ｈＳＵＬＴｌ?Ａ１?ｍｕｔａｎｔｓ??２．３．２．２筛选突变克隆获取冲／７基因ＰＣＲ产物??阴性对照组、ＰＣＢ?２８（?１０?ｐｍｏｌ／Ｌ、２０?ｐｍｏｌ／Ｌ、４０?｜ｉｍｏｌ／Ｌ）、ＰＣＢ?５２（８０?ｐｍｏｌ／Ｌ）??及阳性对照ＮＤＥＡ?（２００卩ｍｏｌ／Ｌ）组随机选择Ｈ）个突变克隆，通过细胞传代扩??大培养后，提取细胞总ＲＮＡ，逆转录成ｃＤＮＡ，并通过ＰＣＲ对ｃＤＮＡ进行／／ｐｒ；??基因片段的扩增，通过琼脂糖电泳鉴定ＰＣＲ扩增产物，如图２－３?（列出部分产物??的电泳结果），部分克隆ｃＤＮＡ无ＰＣＲ扩增产物。??６５??

【参考文献】：
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硕士论文
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本文编号：2949233