纳米二氧化硅对Nrf2/ARE信号通路的影响及其作用

发布时间：2021-01-04 17:28

　　目的:本论文就Nrf2/ARE信号通路在nm-Si O2毒性中的作用及其影响进行了研究。从细胞和动物水平,探讨了nm-Si O2暴露诱导的氧化损伤、Nrf2/ARE信号通路对nm-Si O2毒效应的防御作用及其机制,为nm-Si O2的人群暴露风险评估提供数据,并对nm-Si O2的毒性机制进行了初步探索。方法:nm-Si O2（10-20nm）和μm-Si O2（1-5μm）经表征后,①分别用不同浓度的nm-Si O2和μm-Si O2暴露A549细胞,检测其细胞活力,确定IC50;再用浓度15μg/ml的nm-Si O2和μm-Si O2分别暴露A549细胞,观察其形态学变化,并检测其细胞凋亡、细胞周期、细胞膜电位、SOD活性、ROS含量及Nrf2/ARE信号通路相关蛋白的表达。②构建A549-sh Nrf2细胞模型并作为实验组,A549和A549-sh RNA细胞作为空白对照组和阴性对照组,分别用浓度为15μg/ml的nm-Si O2暴露,检测其细胞活力、SOD活性、ROS含量、T-AOC及Nrf2/ARE信号通路相关蛋白的表达。③选取ICR小鼠和Nrf2-/-ICR小鼠,分别作... 

【文章来源】：湖南师范大学湖南省 211工程院校

【文章页数】：117 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 前言
    1.1 纳米材料及纳米二氧化硅概述
    1.2 纳米材料与纳米二氧化硅毒性及流行病学研究现状
    1.3 Nrf2/ARE信号通路概述
    1.4 本研究的目的意义
    1.5 本研究的实验方案和技术路线
第二章 纳米二氧化硅暴露致A549细胞毒性及Nrf2/ARE信号通路转运激活分析
    2.1 材料与仪器
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 受试细胞
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 主要仪器
        2.1.5 试剂配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 纳米二氧化硅（10-20nm）和微米二氧化硅（1-5μm）的表征
        2.2.2 A549细胞培养及处理
        2.2.3 A549细胞活力分析
        2.2.4 A549细胞周期检测
        2.2.5 A549细胞凋亡检测
        2.2.6 超氧化物歧化酶（SOD）活性检测
        2.2.7 活性氧（ROS）检测
        2.2.8 细胞膜电位检测
        2.2.9 PERK、Nrf2蛋白表达检测
        2.2.10 HO-1 蛋白表达检测
    2.3 统计分析
    2.4 结果
        2.4.1 纳米二氧化硅（10-20nm）和微米二氧化硅（1-5μm）的表征
        2.4.2 纳米二氧化硅暴露对A549细胞生物学性状分析
        2.4.3 纳米二氧化硅暴露对A549细胞周期的影响
        2.4.4 纳米二氧化硅暴露对A549细胞凋亡的影响
        2.4.5 纳米二氧化硅暴露对A549细胞SOD活性的影响
        2.4.6 纳米二氧化硅暴露对A549细胞ROS的影响
        2.4.7 纳米二氧化硅暴露对A549细胞膜电位的影响
        2.4.8 纳米二氧化硅暴露对A549细胞Nrf2/ARE信号通路相关蛋白表达的影响
    2.5 讨论
    2.6 本章小结
第三章 纳米二氧化硅暴露致A549-shNrf2细胞生物学性状变化研究
    3.1 材料与仪器
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 受试细胞
        3.1.3 主要试剂
        3.1.4 主要仪器
        3.1.5 试剂配制
    3.2 实验方法
        3.2.1 A549-shNrf2细胞系的建立
        3.2.2 纳米二氧化硅暴露对A549-shNrf2细胞活力检测
        3.2.3 纳米二氧化硅暴露对A549-shNrf2细胞超氧化物歧化酶（SOD）活性检测
        3.2.4 纳米二氧化硅暴露对A549-shNrf2细胞活性氧（ROS）检测
        3.2.5 纳米二氧化硅暴露对A549-shNrf2细胞T-AOC检测
        3.2.6 纳米二氧化硅暴露对A549-shNrf2细胞PERK、Nrf2蛋白检测
        3.2.7 纳米二氧化硅暴露对A549-shNrf2细胞HO-1 蛋白含量检测
    3.3 统计分析
    3.4 结果
        3.4.1 A549 Nrf2低表达细胞系构建及鉴定
        3.4.2 纳米二氧化硅暴露对A549-shNrf2细胞活力检测
        3.4.3 纳米二氧化硅暴露对A549-shNrf2细胞超氧化物歧化酶（SOD）活性检测
        3.4.4 纳米二氧化硅暴露对A549-shNrf2细胞活性氧（ROS）检测
        3.4.5 纳米二氧化硅暴露对A549-shNrf2细胞T-AOC检测
        3.4.6 纳米二氧化硅暴露对A549-shNrf2细PERK、Nrf2蛋白检测
        3.4.7 纳米二氧化硅暴露对A549-shNrf2细胞HO-1 蛋白含量检测
    3.5 讨论
    3.6 本章小结
第四章 纳米二氧化硅暴露于Nrf2-/-小鼠氧化损伤及Nrf2/ARE信号通路表达分析
    4.1 材料与仪器
        4.1.1 实验材料
        4.1.2 受试动物
        4.1.3 主要试剂
        4.1.4 主要仪器
        4.1.5 试剂配制
    4.2 实验方法
        4.2.1 Nrf2基因敲除小鼠的鉴定
        4.2.2 纳米二氧化硅暴露处理
        4.2.3 肺系数、肝系数、肾系数的测定
        4.2.4 肺组织石蜡切片病理学观察
        4.2.5 肺部纳米二氧化硅粒子的亚细胞定位检测
        4.2.6 小鼠肺组织ROS含量分析
        4.2.7 小鼠肺组织T-AOC测定
        4.2.8 小鼠肺组织 8-OHdG测定
        4.2.9 小鼠肺组织PERK、Nrf2、HO-1 蛋白表达的变化分析
    4.3 统计分析
    4.4 结果
        4.4.1 Nrf2基因敲除小鼠的鉴定
        4.4.2 肺部纳米二氧化硅粒子的亚细胞定位检测
        4.4.3 小鼠体重及肺系数、肝系数、肾系数的测定
        4.4.4 肺组织石蜡切片病理学观察
        4.4.5 小鼠肺组织ROS含量分析
        4.4.6 小鼠肺组织T-AOC测定
        4.4.7 小鼠肺组织 8-OHdG测定
        4.4.8 肺组织PERK、Nrf2、HO-1 蛋白表达的变化分析
    4.5 讨论
    4.6 本章小结
第五章 课题结论及展望
参考文献
综述
    参考文献
附录Ⅰ 缩略词注释表
附录Ⅱ 攻读硕士学位期间取得的成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：2957141