Wnt/β-catenin信号通路在氯化镉诱导HEK293细胞增殖兴奋效应中的作用研究
发布时间：2021-01-20 18:33
研究目的：研究Wnt/β-catenin信号通路在氯化镉诱导HEK293细胞增殖的毒物兴奋效应中的作用，探讨氯化镉所致细胞增殖兴奋效应的机制，为进一步理解毒物兴奋效应及其安全性提供参考。研究方法与研究内容：1.针对β-catenin基因序列设计并合成三对shRNA，构建shRNA质粒载体，干扰HEK293细胞β-catenin基因mRNA表达，阻断细胞Wnt/β-catenin信号通路。2. CCK-8法检测不同剂量氯化镉对HEK293细胞增殖的影响，建立氯化镉所致HEK293细胞增殖兴奋效应模型，并确定毒物兴奋效应剂量范围（Hormetic Zone）。3. CCK-8法检测不同剂量氯化镉对β-catenin基因干扰HEK293细胞增殖的影响，探讨Wnt/β-catenin信号通路在氯化镉所致细胞增殖兴奋效应中的作用。4.实时荧光定量PCR法检测不同剂量氯化镉作用于HEK293细胞与β-catenin基因干扰HEK293细胞24h后Cyclin D1、c-myc基因的表达水平。5.流式细胞术检测不同剂量氯化镉作用于HEK293细胞与β-catenin基因干扰的HEK293细胞24h后...
【文章来源】：暨南大学广东省 211工程院校
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
1剂量-反应关系模型
/LEF）家族转录因子形成转录（图 1.2.1.A），最后形成 β-catenin激活下游 c-myc、Cyclin、surivin、c-jun、c-fos、twist 等目的基0]。正常机体中 Wnt/β-catenin 信号通路是处于静默状态的，但 Wnt 信号传入细胞内使 β-catenin 的降解受抑制，导致 β-catenin 。β-catenin 细胞内表达水平高低决定着 Wnt/β-catenin 信号通路 GSK-3β、Axin 以及 APC 蛋白的调控，这些蛋白的主要作用是促 β-catenin 在细胞内保持低水平，从而关闭 Wnt 通路[21]。
图1.3.1 RNA干扰作用机制关键，要进行 RNAi 首先需要获得目的基因。理论上按照目的基因 cDNA 为模版的 si互补结合，诱导目的基因 mRNA 降解。但区域设计的 siRNA 才能获得较高的基因干扰A 干扰序列设计的 AA 原则：1.选择在目的 100nt 以后的序列；2.尽量避开 5’和 3’UTR的区域；3.G/C 含量比在 40%~60%之间，免连续 4 个及以上的碱基重复，所有碱基应序列，避开单核苷酸多肽性（SNP）位点行同源性分析，确保设计的干扰序列与其他
【参考文献】：
期刊论文
[1]CYP1A2基因沉默及其对三氯乙烯毒性影响[J]. 徐新云,毛侃琅,毛吉炎,吴德生,秦逍云,杨细飞,张然,周丽,黄新凤. 中国职业医学. 2013(04)
[2]甲醛对原癌基因c-myc、MDM2及抑癌基因p53的影响[J]. 李慧,张玉超,柯玉洁,秦晓丹,刘旭东,问华肖,熊棣,李睿,杨旭,丁书茂. 中国环境科学. 2013(08)
[3]Caspase-3 shRNA对染铝神经细胞凋亡的干预[J]. 张勤丽,教霞,徐丽,李娜,牛侨. 毒理学杂志. 2012(04)
[4]肝细胞癌相关细胞信号转导通路的研究进展[J]. 王林金,陈茂伟. 临床荟萃. 2012(03)
[5]ERK信号转导通路在CdCl2诱导HEK293细胞低剂量兴奋效应中的作用[J]. 郝长付,郝卫东. 卫生研究. 2011(04)
[6]siRNA沉默β-Catenin对肝星状细胞增殖和凋亡的影响[J]. 葛文松,吴建新,陈颖伟,范建高. 实用肝脏病杂志. 2011(02)
[7]多氯联苯对大鼠肾脏c-fos、c-Myc和β-catenin表达影响的研究[J]. 周焕发,赵红斌,杨银书,程谋涛,刘旭东. 癌变·畸变·突变. 2010(06)
[8]重铬酸钾处理人胚肺细胞A549的Hormesis效应及对某些修复基因表达的影响[J]. 李时恩,周丽丽,董豪杰,吴逸明. 工业卫生与职业病. 2010(05)
[9]综合性医院急性中毒患者的回顾性流行病学分析[J]. 陈姣,韩继媛. 临床急诊杂志. 2008(05)
[10]毒理学默认量效关系模型的重新审视[J]. 刘秀英,胡怡秀. 国外医学(卫生学分册). 2008(05)
博士论文
[1]WNT/β-catenin信号通路在HDACis抗急性T淋巴细胞白血病中作用及机制研究[D]. 邵娜.山东大学 2012
[2]低剂量辐射对成体神经干细胞增殖分化的刺激作用及其Wnt/β-catenin分子机制的研究[D]. 丁银秀.第四军医大学 2012
硕士论文
[1]低剂量MTBE诱导L929细胞增殖的毒物兴奋效应的研究[D]. 江淑仪.暨南大学 2011
[2]JNK/c-Jun信号通路在低浓度亚砷酸钠所致HELF细胞增殖异常和细胞周期紊乱中的作用[D]. 徐辉.南京医科大学 2009
本文编号：2989557
【文章来源】：暨南大学广东省 211工程院校
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
1剂量-反应关系模型
/LEF）家族转录因子形成转录（图 1.2.1.A），最后形成 β-catenin激活下游 c-myc、Cyclin、surivin、c-jun、c-fos、twist 等目的基0]。正常机体中 Wnt/β-catenin 信号通路是处于静默状态的，但 Wnt 信号传入细胞内使 β-catenin 的降解受抑制，导致 β-catenin 。β-catenin 细胞内表达水平高低决定着 Wnt/β-catenin 信号通路 GSK-3β、Axin 以及 APC 蛋白的调控，这些蛋白的主要作用是促 β-catenin 在细胞内保持低水平，从而关闭 Wnt 通路[21]。
图1.3.1 RNA干扰作用机制关键，要进行 RNAi 首先需要获得目的基因。理论上按照目的基因 cDNA 为模版的 si互补结合，诱导目的基因 mRNA 降解。但区域设计的 siRNA 才能获得较高的基因干扰A 干扰序列设计的 AA 原则：1.选择在目的 100nt 以后的序列；2.尽量避开 5’和 3’UTR的区域；3.G/C 含量比在 40%~60%之间，免连续 4 个及以上的碱基重复，所有碱基应序列，避开单核苷酸多肽性（SNP）位点行同源性分析，确保设计的干扰序列与其他
【参考文献】：
期刊论文
[1]CYP1A2基因沉默及其对三氯乙烯毒性影响[J]. 徐新云,毛侃琅,毛吉炎,吴德生,秦逍云,杨细飞,张然,周丽,黄新凤. 中国职业医学. 2013(04)
[2]甲醛对原癌基因c-myc、MDM2及抑癌基因p53的影响[J]. 李慧,张玉超,柯玉洁,秦晓丹,刘旭东,问华肖,熊棣,李睿,杨旭,丁书茂. 中国环境科学. 2013(08)
[3]Caspase-3 shRNA对染铝神经细胞凋亡的干预[J]. 张勤丽,教霞,徐丽,李娜,牛侨. 毒理学杂志. 2012(04)
[4]肝细胞癌相关细胞信号转导通路的研究进展[J]. 王林金,陈茂伟. 临床荟萃. 2012(03)
[5]ERK信号转导通路在CdCl2诱导HEK293细胞低剂量兴奋效应中的作用[J]. 郝长付,郝卫东. 卫生研究. 2011(04)
[6]siRNA沉默β-Catenin对肝星状细胞增殖和凋亡的影响[J]. 葛文松,吴建新,陈颖伟,范建高. 实用肝脏病杂志. 2011(02)
[7]多氯联苯对大鼠肾脏c-fos、c-Myc和β-catenin表达影响的研究[J]. 周焕发,赵红斌,杨银书,程谋涛,刘旭东. 癌变·畸变·突变. 2010(06)
[8]重铬酸钾处理人胚肺细胞A549的Hormesis效应及对某些修复基因表达的影响[J]. 李时恩,周丽丽,董豪杰,吴逸明. 工业卫生与职业病. 2010(05)
[9]综合性医院急性中毒患者的回顾性流行病学分析[J]. 陈姣,韩继媛. 临床急诊杂志. 2008(05)
[10]毒理学默认量效关系模型的重新审视[J]. 刘秀英,胡怡秀. 国外医学(卫生学分册). 2008(05)
博士论文
[1]WNT/β-catenin信号通路在HDACis抗急性T淋巴细胞白血病中作用及机制研究[D]. 邵娜.山东大学 2012
[2]低剂量辐射对成体神经干细胞增殖分化的刺激作用及其Wnt/β-catenin分子机制的研究[D]. 丁银秀.第四军医大学 2012
硕士论文
[1]低剂量MTBE诱导L929细胞增殖的毒物兴奋效应的研究[D]. 江淑仪.暨南大学 2011
[2]JNK/c-Jun信号通路在低浓度亚砷酸钠所致HELF细胞增殖异常和细胞周期紊乱中的作用[D]. 徐辉.南京医科大学 2009
本文编号：2989557
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