转基因甜菜GTSB77品系特异性实时荧光聚合酶链式反应检测方法建立

发布时间：2021-01-22 07:25

　　目的为实现转基因甜菜GTSB77的标识管理,建立其品系特异性实时荧光聚合酶链式反应（PCR）检测方法。方法针对GTSB77的3’端外源插入片段与甜菜基因组DNA之间的邻接区序列设计引物和探针,建立GTSB77品系特异性实时荧光PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行检测。结果建立的GTSB77检测方法特异性强,定量限（LOQ）为16拷贝,扩增效率为102%,重复性测试结果相对标准偏差（RSD）介于0. 21%～1. 66%之间。结论建立的实时荧光PCR方法可应用于GTSB77的鉴定检测。 

【文章来源】：中国食品卫生杂志. 2020,32(01)北大核心

【文章页数】：4 页

【部分图文】：

GTSB77外源插入片段示意图

GTSB77特异性序列

图2 GTSB77特异性序列品系特异性实时荧光PCR扩增反应体系(25μl):Premix Ex TaqTM12.5μl,ROX Reference Dye II 0.2μl,10μmol/L上下游引物各0.5μl,10μmol/L检测探针0.5μl,DNA模板2μl,dd H2O8.3μl。反应程序:95℃预变性30 s;95℃变性5 s、60℃退火延伸34 s,40个循环，于60℃收集荧光信号。


本文编号：2992829